Técnicas de hibridación y electroforesis: principios, fases y procedimientos
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Desnaturalización y renaturalización
Desnaturalización: aumento de temperatura → disminuye la proporción de ADN de doble cadena (ds); aumenta la proporción de ADN de cadena sencilla (ss).
Renaturalización: descenso de temperatura → favorece el reensamblaje de cadenas complementarias. A mayor longitud de la secuencia, mayor es la Tm (temperatura de fusión).
Factores que afectan la Tm: Contenido GC: aumenta la Tm. Mismatch (desajustes): disminuye la Tm. Agentes desnaturalizantes: disminuyen la Tm. Cationes: aumentan la Tm.
Técnicas de hibridación
Definición: La hibridación es la unión específica de una sonda de ácido nucleico con una secuencia complementaria presente en una muestra.
Fases
- Preparación de la muestra y soporte (pre-hibridación)