Fundamentos de Biología Molecular: Extracción, Amplificación y Análisis de Ácidos Nucleicos
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1. Extracción y Purificación de Ácidos Nucleicos
- Lisis: Las células sanguíneas o seminales se someten a soluciones hipotónicas para provocar su ruptura por ósmosis. En muestras tisulares, se utiliza un buffer de lisis con detergentes para liberar el contenido celular y romper las membranas.
- Aislamiento: Tras la centrifugación, se obtiene el sobrenadante (fase acuosa con ADN), lípidos en la fase de fenol (más densa), proteínas en la interfase y restos celulares en el sedimento.
- Precipitación: El uso de etanol absoluto y sales reduce las fuerzas repulsivas en las cadenas, permitiendo que el ADN se pliegue y se vuelva insoluble. Se trabaja a 0ºC para disminuir la energía cinética de las moléculas. Finalmente, se utiliza buffer TE
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