Fundamentos del Medio KIA e Identificación Bioquímica Bacteriana

Fundamentos del Medio KIA (Kligler Iron Agar)

El medio KIA se basa en el siguiente principio: las bacterias, en general, usan los azúcares como fuente de carbono formando ácidos. Si no encuentran azúcares, utilizan proteínas y, en este caso, alcalinizan el medio.

Es importante destacar que los azúcares o glúcidos se asimilan mejor por ser las moléculas más sencillas; por lo tanto, se asimila mejor la glucosa que la lactosa. Por otro lado, las proteínas se metabolizan de forma óptima en presencia de oxígeno.

Preparación y Siembra del Medio

La preparación se realiza siguiendo las instrucciones del frasco: se reparte en tubos grandes, se esteriliza en autoclave y se deja solidificar de forma inclinada. A continuación, se realiza la siembra mediante la técnica de picadura y estría en la superficie. Finalmente, se incuba a 37 °C durante un periodo de 18 a 24 horas.

Interpretación de Resultados en KIA

• Metabolismo: Se observa si metabolizan glucosa y la consecuente formación de ácidos, entre otros procesos.
• Producción de gas: Se manifiesta mediante la rotura del medio, agrietamientos, desplazamiento del mismo o la formación de burbujas.
• Producción de SH2 (Ácido Sulfhídrico): El medio contiene un indicador de hierro que reacciona con el SH2. Es posible que se forme un color negro; este color se origina debido a la existencia de un pH ácido con fondo amarillo.

Sistemas Comerciales de Identificación

El material o los reactivos se adquieren en kits, los cuales constan de 10 a 20 microtubos que contienen los medios deshidratados. Estos se hidratan frecuentemente mediante la suspensión bacteriana que se está investigando.

Después de la incubación, se observa si ha ocurrido un cambio de color en el medio o si se producen reacciones al añadir reactivos específicos. Existen tablas de referencia y, tras determinar si el resultado es positivo (+) o negativo (-), se rellena una hoja de resultados.

Codificación y Especies

Los resultados se agrupan en bloques de 3 tubos (asignando valores de 1, 2 y 4; no se usa el 3, ¡ojo!). De esta forma, se obtiene un código de 7 cifras que permite identificar el nombre de la especie bacteriana correspondiente.

Conservación de Cultivos Bacterianos

Conservación a Corto Plazo

Para periodos cortos, se utiliza la refrigeración de 4 a 8 °C. En medio sólido, se emplea normalmente el agar inclinado, mientras que en medio líquido la elección depende del microorganismo específico.

Conservación a Largo Plazo

Para periodos prolongados se utilizan métodos como el aceite o suspensiones en suero.

Método de Desecación

Se suspende con un asa de siembra un inóculo (pequeña cantidad de microorganismos) en 2 ml de suero estéril. A continuación, se coloca una gota de suero en los tubos estériles, se cierra el tapón y se procede al secado al vacío. Posteriormente, se introduce en otro recipiente de vidrio al que se le aplica vacío y se cierra a la llama.

Liofilización

En la liofilización, se congela la bacteria y se sublima el hielo que contiene. Acto seguido, la muestra se guarda en ampollas al vacío, lo que permite su conservación por tiempos muy extensos.