Determinación de Grupos Sanguíneos AB0: Protocolos de Laboratorio en Portaobjetos y Tubo

Determinación del Grupo Sanguíneo AB0 en Portaobjetos

Fundamento

Este método se basa en la observación de la aglutinación de los hematíes del individuo al ser expuestos a antisueros específicos (anti-A y anti-B) de eficacia conocida, permitiendo así la determinación del grupo sanguíneo AB0.

Material

• Portaobjetos
• Pipetas Pasteur
• Rotulador para vidrio
• Palillos agitadores
• Visualizador luminoso

Reactivos

• Suero anti-A
• Suero anti-B

Muestra

• Sangre total anticoagulada

Técnica

1. Dividir el portaobjetos en dos secciones con el rotulador y marcarlas con las letras A y B, respectivamente.
2. En la sección A, añadir una gota de suero anti-A; en la sección B, añadir una gota de suero anti-B.
3. Añadir una gota de la muestra de sangre a cada sección y mezclar cuidadosamente con un palillo diferente para cada una, evitando la contaminación cruzada.
4. Oscilar suavemente el portaobjetos hacia adelante y hacia atrás durante dos minutos.
5. Observar la presencia o ausencia de aglutinación.

Lectura de Resultados

• Esperar dos minutos antes de proceder a la lectura de los resultados.
• Aglutinación positiva: Se observa la formación de grumos rojos sobre un fondo claro.
• Aglutinación negativa: La mezcla permanece como una suspensión homogénea de los hematíes.

Determinación del Grupo Sanguíneo AB0 en Tubo

Fundamento

Este método se basa en la reacción de los hematíes del paciente, que contienen antígenos del sistema AB0, con sueros conocidos que poseen anticuerpos específicos (Ac) contra dichos antígenos (Ag). El resultado se manifiesta por la presencia o ausencia de aglutinación en los hematíes reaccionantes.

Material

• Tubos de hemólisis para centrífuga
• Rotulador para vidrio
• Gradillas
• Pipetas Pasteur
• Centrífuga

Reactivos

• Suero anti-A
• Suero anti-B
• Suero anti-AB
• Suero fisiológico

Muestra

• Sangre total anticoagulada, preferiblemente en forma de suspensión de hematíes problema.

Técnica

1. Lavar los hematíes problema: Rotular un tubo, añadir 1 ml de la muestra de sangre y completar el volumen con suero fisiológico.
2. Agitar suavemente para suspender los hematíes.
3. Centrifugar a 2000 rpm durante 4 minutos y decantar el sobrenadante.
4. A los hematíes del tubo se les añade suero fisiológico para obtener una suspensión al 2% (el rango óptimo es entre 2-4%).
5. Rotular tres tubos con las letras A, B y AB, respectivamente.
6. Añadir dos gotas de suero anti-A en el tubo A, dos gotas de suero anti-B en el tubo B y dos gotas de suero anti-AB en el tubo AB.
7. Centrifugar los tubos durante 1 minuto a 1000 rpm.

Lectura de Resultados

• Despegar el botón hemático golpeando suavemente el tubo con el pulpejo del dedo.
• Se considera aglutinación positiva si se observan grumos de color rojo en un líquido claro.
• Si los hematíes se resuspenden homogéneamente, se considera aglutinación negativa.
• El tubo de albúmina (o control negativo) debe mostrar siempre ausencia de aglutinación. Si no es así, el resultado de la prueba no será válido.