Técnicas de endurecimiento y conservación de tejidos para microscopía
Inclusión de Muestras
Como regla general, se procede al endurecimiento de la muestra para obtener secciones delgadas. Cuanto más delgada la sección deseada, más consistente debe ser la muestra. La congelación de tejidos previamente fijados permite obtener secciones desde 50 µm hasta nm, utilizando:
- Microtomo de congelación: secciones de decenas de µm.
- Criostato: secciones de 5 a 20 µm.
- Ultracriotomo: secciones ultrafinas del orden de nm.
Para evitar daños por formación de cristales de hielo, se deben considerar:
- Anticongelantes (crioprotectores) como la sacarosa al 30%, dimetil sulfóxido, glicerol, etilén glicol.
- Congelación rápida con nitrógeno líquido.
- Obtención de secciones de grosor variable mediante diferentes métodos de endurecimiento.