Métodos complementarios en citología: morfología, tinciones, inmunohistoquímica y biología molecular

Métodos complementarios en citología

1. Métodos morfológicos y de biología celular

Pruebas complementarias: métodos morfológicos o biológicos (histoquímica, microscopía electrónica y cultivo celular). Métodos cuantificadores (citometría de flujo, análisis de imagen). Métodos inmunológicos (inmunocitoquímica). Biología molecular (hibridación in situ, PCR).

Núcleo

• Número: forma esférica, oval o lobulada.
• Importancia: valorar irregularidades, posición central o excéntrica, tamaño, relación núcleo/citoplasma (N/C), cariomegalia y anisocariosis.
• Coloración: cantidad (hipercromasia, aumento de cromatina) y aspecto (grueso, fino, compacto, cromocentros, paracromatina).
• Distribución: uniforme o irregular, marginada, cromatina sexual o corpúsculo de Barr.
• Nucléolo: de 1 a 3, indicador de actividad metabólica celular.

Indicadores de lesión celular

• Picnosis (retracción y condensación nuclear).
• Cariorrexis.
• Cariólisis.

Citoplasma

La forma y el tamaño dependen del tejido de origen. Reacción tintorial:

• Basófilo o cianófilo: azul.
• Eosinófilo o acidófilo: rosa.
• Oxifílo: anaranjado.
• Anfófilo: sin tinción.

Inclusiones citoplasmáticas

• Secretoras: mucina.
• De reserva: glucógeno, grasa.
• Pigmentos: carbón, melanina.

Pueden observarse con tinciones habituales. Tinciones especializadas:

• PAS: mucopolisacáridos y glucoproteínas.
• Oil Red O: lípidos.
• Perls: hierro y hemosiderina.

2. Tinciones

• Papanicolaou: hematoxilina básica para núcleo (azul-púrpura); naranja G y proteínas; eosina para citoplasma (tinción aniónica, rosado).
• Shorr: citodiagnóstico hormonal de células de epitelio vaginal; queratina en rojo; no queratinizadas en azul.
• May-Grünwald-Giemsa: punciones e improntas. Núcleo azul-púrpura a negro; citoplasma violeta o marrón pálido.
• Diff-Quick: tinción rápida de extendidos.

3. Recursos tecnológicos además del microscopio

• Inmunohistoquímica e inmunocitoquímica.
• Citometría de flujo e imagen: el citómetro mide la cantidad y tipo celular, la cantidad de ADN y el aspecto morfológico, mediante fluorocromos o colorantes especiales.
• Técnicas de biología molecular: hibridación in situ y PCR.

4. Idoneidad de la muestra

Citodiagnóstico correcto

• Toma de muestra adecuada: representativa de la zona de transformación, extensión celular fina y uniforme, fijación rápida, sin inflamación ni sangre.
• Datos clínicos relevantes: edad, condición hormonal, fecha de la toma y de la regla, anticonceptivos, terapias, estudios citológicos previos.
• Procesado citológico impecable.
• Reconocimiento e interpretación sin errores: conocer hábitos y fatiga del observador.

Medidas para evitar errores

• Revisión diaria del 10 % al azar.
• Revisión rápida (cribado): todos los negativos e inadecuados, con poco aumento y rapidez.
• Métodos automáticos: captura de imagen de células anormales.

Sistema Bethesda: criterios para establecer la idoneidad de la muestra

• Tipo de muestra a estudiar: indicar si es frotis convencional, citología líquida, etc.
• Definición de idoneidad: satisfactoria o insatisfactoria.
• Categorización general:
  • Negativa para lesión intraepitelial o malignidad (incluye la presencia de determinados microorganismos y otros hallazgos neoplásicos).
  • Anomalía celular epitelial (especificar si es escamosa o glandular).
  • Otros (incluye células endometriales en mayores de 40 años, neoplasias epiteliales, etc.).
• Revisión automática de la muestra: indicando el aparato usado y el resultado.

Frotis satisfactorio

• Etiquetado e información de identificación adecuada.
• Información clínica relevante.
• Cantidad adecuada de células escamosas bien conservadas y visualizadas: 8.000-12.000 en normal y 5.000 en líquida.
• Componente adecuado de endocérvix y epitelio transformado: 10 células endocervicales o neoplásicas.

Insatisfactorio

Se devuelve o no se procesa. Si se procesa y examina pero resulta insatisfactorio, es poco fiable.

5. Evaluación hormonal

Utilidades del citodiagnóstico hormonal en ginecología

• Valoración de la función ovárica.
• Cálculo de la fecha de ovulación.
• Valoración de la función placentaria.
• Selección y seguimiento de terapias.

Interpretación del extendido citológico

• Para una correcta valoración funcional es necesario un estudio seriado.
• La toma debe ser exclusivamente vaginal.
• Se requiere un mínimo de datos clínicos (edad, fechas, etc.).
• La inflamación invalida la valoración.

Vaginosis citolítica

Cursa con prurito, dispareunia y secreción aumentada; puede confundirse con micosis. En los extendidos se observan gran cantidad de lactobacilos, numerosos núcleos desnudos, escasos leucocitos y pH ácido. El examen microbiológico es negativo para hongos, Trichomonas y Gardnerella.

6. Citología en el embarazo

6.3 Citología en el embarazo

• Displasia gestacional: suele remitir o estabilizarse, pero debe procederse con cautela.
• Presencia de células glandulares atípicas durante la gestación o el posparto: puede tratarse de lesiones intraepiteliales, incluido el adenocarcinoma in situ.
• Mola hidatidiforme (trofoblástica): suele requerir legrado endometrial (raspado).
• Coriocarcinoma: tumor maligno derivado de mola, puede metastatizar y requiere quimioterapia.

Deficiencias vitamínicas

Se manifiestan en el extendido: déficit de ácido fólico con citomegalia, aumento del tamaño nuclear manteniendo la relación N/C, multinucleación y ausencia de hipercromatismo.

Utilidad de la citología exfoliativa

• Amenaza de aborto: patrón estrogénico superficial.
• Aborto diferido o muerte fetal: células parabasales, endometriales y trofoblásticas.
• Rotura de bolsa: células escamosas anucleadas y vérnix caseosa.
• Procesos infecciosos:
  • Herpes: peligro para el bebé durante el parto, por lo que se indica cesárea.
  • Vaginosis bacteriana: mayor riesgo de corioamnionitis.
  • Trichomonas: asociado a prematuridad y bajo peso.

Citología del líquido amniótico

Escamas anucleadas de piel fetal, vérnix caseosa, células pavimentosas de piel, vagina o mucosa bucal del feto, células amnióticas y macrófagos.

6.4 Efecto de anticonceptivos y terapias

• Anticonceptivo oral combinado (levonorgestrel y etinilestradiol): patrón intermedio, características similares al efecto progestacional; predominio de células pavimentosas intermedias amontonadas y plegadas en el borde, células navicu lares y lactobacilos, que pueden producir citólisis.
• Acetato de medroxiprogesterona: en los primeros meses, efecto progestacional similar al de la gestación. Tiempo prolongado: atrofia, imagen parecida al posparto y atipias nucleares.
• Levonorgestrel subdérmico, DIU y píldora de urgencia: durante años no se observa incidencia de lesiones displásicas, pero sí más frotis inflamatorios.
• Anticonceptivo oral: cambios en células pavimentosas similares a los del VPH.
• Posmenopausia con terapia hormonal sustitutiva: aumento de células endometriales.
• Tamoxifeno (tratamiento del cáncer de mama): grupos de células pequeñas con escaso citoplasma y núcleos hipercromáticos.

6.5 Características de la menopausia y posmenopausia

Otros cambios

• Colpitis senil: inflamación de la mucosa vaginal por alteración del equilibrio, como sequedad. Células parabasales pequeñas con citoplasma basófilo o eosinófilo y núcleos picnóticos y cariorrexis.
• Cuerpos azules: restos de células parabasales.
• Fondo sucio.
• Cierta actividad androgénica: abundantes parabasales con borde engrosado, con glucógeno y núcleos pequeños e hipercromáticos.