Cultivos celulares: fases de crecimiento en monocapa y suspensión y mantenimiento del medio

Resumen

El documento compara los cultivos celulares primarios y continuos (líneas celulares) y describe las etapas del crecimiento tanto en monocapa como en suspensión. Explica también las características fisicoquímicas del medio de cultivo (pH, osmolaridad, viscosidad y tensión superficial), los procedimientos básicos de trabajo y la forma correcta de cambiar el medio. Es un material útil para repasar la práctica de laboratorio con células.

Puntos clave

El cultivo primario se obtiene directamente de un tejido u órgano y tiene una vida limitada mediante pases seriados.
Las líneas celulares (cultivo continuo) proliferan indefinidamente, pierden la inhibición por contacto y acumulan anomalías genéticas.
En monocapa, el crecimiento pasa por adhesión (latencia), proliferación exponencial y fase estacionaria por inhibición por contacto; el subcultivo se hace al final de la fase exponencial.
En suspensión, el crecimiento se detiene por inhibición por densidad, al alcanzar un número crítico de células respecto al volumen.
El pH óptimo del medio es 7,4 y la osmolaridad debe estar entre 260 y 320 mOsm/kg.
El cambio de medio se realiza cada 2-3 días en cabina de clase II, renovando 2/3 del volumen en monocapa o centrifugando en suspensión.

Ponte a prueba

Diferencias entre Cultivos Celulares

Cultivo Primario

Obtenido a partir de un tejido u órgano.
Se mantiene mediante pases seriados durante un tiempo limitado.
Se estabiliza en la 3.ª fase.
Pierde contacto por inhibición.
Pierde la dependencia de anclaje para crecer.

Cultivo Continuo (Líneas Celulares)

Se obtiene a partir de un cultivo primario.
Tiempo ilimitado mediante pases seriados; crecen indefinidamente.
Pierden la dependencia de anclaje y la inhibición por contacto.
Pueden invadir tejido y producir tumores.
Acumulan anomalías genéticas.

Etapas del Crecimiento en Monocapa

Adhesión a una superficie (Latencia): Fase inicial de adaptación.
Proliferación y formación de colonias (Fase exponencial): Las células comienzan a crecer y formar colonias.
Inhibición por contacto (Fase estacionaria): Las células se juntan, dejan de crecer por inhibición y recuperan características morfológicas similares a las células originales.

Nota: Para mantener el cultivo, se debe realizar el subcultivo al final de la fase exponencial.

Etapas del Crecimiento en Suspensión

Adaptación del medio de cultivo (Latencia): Preparación metabólica.
Proliferación en suspensión (Fase exponencial): Crecimiento activo.
Inhibición por densidad: Se alcanza un número crítico de células en relación con el volumen, deteniéndose el crecimiento.

Características Fisicoquímicas del Medio de Cultivo

pH óptimo: 7,4, mantenido mediante tampones e indicadores de pH.
Osmolaridad: Debe ser isotónica o ligeramente hipotónica (rango de 260-320 mOsm/kg).
Viscosidad: Depende del suero; una viscosidad elevada protege el cultivo durante la tripsinización y agitación.
Tensión superficial: Mantener baja; si hay burbujeo de CO2, añadir antiespumantes.

Procedimientos en Cultivo Celular

Disgregación celular.
Recuento y viabilidad celular.
Descongelación celular.
Siembra del cultivo.
Mantenimiento del cultivo.
Conservación de las células.

Cambio del Medio de Cultivo

Se realiza en cabinas de seguridad biológica de clase II con la finalidad de renovar nutrientes y retirar productos de desecho.

Frecuencia: Cada 2-3 días, observando el cambio de color del indicador de pH.
Volumen: Se cambia 2/3 del volumen para conservar sustancias beneficiosas secretadas por las células.
Monocapa: Se retira el medio viejo con una pipeta y se repone.
Suspensión: Se centrifuga el cultivo, se retira el medio y se repone con medio fresco.

Preguntas frecuentes

¿Cuál es la diferencia entre un cultivo primario y un cultivo continuo?

El cultivo primario se obtiene directamente de un tejido u órgano y se mantiene mediante pases seriados durante un tiempo limitado. El cultivo continuo o línea celular se obtiene a partir de un cultivo primario y puede crecer indefinidamente.

¿Cada cuánto tiempo se debe cambiar el medio de cultivo?

Según el texto, el medio se cambia cada 2-3 días, observando el cambio de color del indicador de pH. Se renueva 2/3 del volumen para conservar las sustancias beneficiosas secretadas por las células.

¿Cuándo se debe hacer el subcultivo en monocapa?

Para mantener el cultivo, el subcultivo se realiza al final de la fase exponencial, cuando las células están proliferando activamente.