Técnicas de PCR y Hitos de la Biología Molecular: Tipos, Usos y Procesos del ADN
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Tipos de PCR
Tipos PCR | Reactivos | Muestra | Utilidad | Visualización |
Convencional | Mix PCR + primers | ADN | Amplifica + cuantifica | Electroforesis (gel de agarosa) |
Nested | Mix PCR + 2 tipos de primers diferentes (externos e internos) | ADN | Poca muestra | Electroforesis (gel de agarosa) |
Multiplex | Mix PCR + múltiples primers | ADN | Diferentes genes | Electroforesis (gel de agarosa) |
RT - qPCR | Mix PCR + primers + retrotranscriptasa | ARN | ¿Gen se expresa? Genotipos, virus | Método Ct (fluorescencia + nº Ct) |
RT - TaqMan | Mix PCR + primer + sonda (Q y F) | ADN | Amplificar en tiempo real | Electroforesis (gel de agarosa) |
RT - Molecular Beacon | Mix PCR + sonda en horquilla (Q y F) | ADN | Amplificar en tiempo real + especificidad | Electroforesis (gel de agarosa) |
RT Scorpion | Mix PCR + sonda unida a bloqueador y primers | ADN | Amplificar en tiempo real | Electroforesis (gel de agarosa) |
OSMA | Mix PCR + 6 primers + Taq polimerasa Bst + pirofosfato de magnesio + (subproducto de reacción, turbidez) retrotranscriptasa | ARN | Cuantificación Turbidez (ganglio linfático) | Define el tiempo que tarda en llegar a 0,1 (turbidez) |
Hitos históricos en genética y biología molecular
Año de descubrimiento | Nombre del/la/los científicos | Descubrimiento |
1902 | Theodor Boveri y Walter Sutton | Teoría cromosómica de la herencia |
1982 | Richard Palmiter | 1r ratón transgénico |
1993/2012 | Francisco Mojica, Emmanuelle Charpentier y Jennifer Doudna | CRISPR |
1953 | James Watson, Francis Crick y Rosalind Franklin | Doble hélice del ADN |
1986 | Kary Banks Mullis | Desarrollo de la PCR |
1996 | Ian Wilmut y Keith Campbell | Clonación de mamífero (oveja Dolly) |
1968/1972 | Paul Berg y Grete Kellenberger | Primeros estudios con ADN recombinante |
Replicación, transcripción y traducción
Replicación - Transcripción - Traducción (ADN - ARN - proteína)
REPLICACIÓN
Semiconservativa — doble hebra (molde y complementaria):
- 1 doble hebra de ADN (2 células iguales entre sí)
Helicasas — horquilla de replicación (se abren las hebras)
- ADN polimerasa 5' ——> 3'
TRANSCRIPCIÓN
ADN ——> ARNm
ARN polimerasa — TATA box — código ARN (T ——> U)
Maduración del ARNm:
- caperuza 5' - cola poli-A 3' - splicing (eliminación de intrones)
TRADUCCIÓN
ARNm ——> tripletes ——> cadenas polipeptídicas
AUG (metionina) ——> INICIO
ARNt ——> anticodón ——> se une a la proteína
UAA / UAG / UGA ——> STOP