Reacciones de Aglutinación y Precipitación en Inmunología: Tipos, Técnicas y Aplicaciones Diagnósticas

Reacciones de aglutinación

Aglutinación: capacidad de un anticuerpo de unirse a un antígeno y de cada antígeno de unirse a otros anticuerpos específicos, formando una red antígeno-anticuerpo que provoca la aglutinación en medio, dando lugar a un inmunocomplejo o agregado visible.

1) Aglutinación directa

Permite detectar la reacción de aglutinación que provoca la formación del inmunocomplejo. Utiliza suspensiones de antígenos particulados (bacterias, esporas) que presentan antígenos en su membrana. Cuando estos antígenos se enfrentan al suero problema con anticuerpos específicos, se produce aglutinación y formación de inmunocomplejos.

A) Prueba rápida de aglutinación en placa

Utiliza una suspensión bacteriana del género Brucella teñida con rosa de Bengala como antígeno. Permite hallar anticuerpos frente a Brucella en el diagnóstico de la brucelosis.

Muestra: sangre-suero.

B) Hemaglutinación directa

Permite determinar el grupo sanguíneo en el sistema ABO y Rh. Existen cuatro fenotipos básicos: A (eritrocitos con antígeno A, anticuerpos anti-B), B, AB y O; y Rh positivo (eritrocitos con antígeno D) o negativo.

Muestra: sangre. Busca antígenos de membrana de los eritrocitos A, B y D.

2) Aglutinación indirecta

Emplea un antígeno soluble que se vuelve insoluble mediante fijación a un soporte sólido inerte (bolas de látex, carbón activado) o a una célula (eritrocitos).

A) Aglutinación de látex en placa

Es una de las técnicas más utilizadas. Las partículas de látex son esferas diminutas de poliestireno sobre las que se une un anticuerpo o un antígeno soluble mediante interacción hidrofóbica. Así queda sensibilizada y se utiliza para detectar antígenos o anticuerpos. Se aplica para determinar anticuerpos antiestreptolisina O (Ac ASO).

Muestra: sangre-suero. Busca anticuerpos.

B) Hemaglutinación indirecta (HAI)

Usa como soporte hematíes tratados. No se trata de antígenos de los hematíes, sino de un soporte para unir antígenos de distinta procedencia frente a los que se buscan anticuerpos específicos. Se aplica en la determinación de anticuerpos frente a Toxoplasma gondii.

Muestra: sangre-suero. Busca anticuerpos.

C) Inhibición de la hemaglutinación

Aprovecha la capacidad de virus y bacterias de unirse a receptores de membrana de mamíferos y aves. Se utiliza para detectar en el suero problema anticuerpos específicos frente a esos virus o bacterias. Aplicación: diagnóstico de la rubeola.

Muestra: sangre-suero. Busca anticuerpos.

D) Prueba de Coombs

Utiliza el reactivo de Coombs, que al incubarse con eritrocitos lavados del paciente provoca aglutinación.

• Directa: detección de anticuerpos unidos a eritrocitos. Diagnóstico de anemia autoinmune o hemolítica del recién nacido. Muestra: eritrocitos del paciente. Busca anticuerpos.
• Indirecta: detección de inmunoglobulinas anti-Rh en el suero materno y aplicación en la detección del antígeno Duffy. Muestra: sangre-suero. Busca antígenos.

Reacciones de precipitación

Precipitación: la unión de un antígeno soluble (multivalente o bivalente) con un anticuerpo específico da lugar a un inmunocomplejo que, debido a su tamaño, no puede mantenerse en disolución y precipita.

1. Medio líquido

Mide la turbidez que produce la precipitación de inmunocomplejos en medio líquido. No es muy utilizada. Incluye la turbidimetría y la nefelometría.

A) Inmunoturbidimetría

Compara la intensidad del rayo de luz emergente con la del incidente. Existe una relación entre la concentración del analito y la transmitancia medida en el espectrofotómetro, lo que permite calcular la concentración del analito. Aplicación: determinación cuantitativa de IgA, IgG e IgM.

Muestra: sangre-suero. Busca inmunoglobulinas.

B) Inmunonefelometría

Mide la concentración de antígenos. Se forman inmunocomplejos pequeños que, al formar un precipitado, dispersan la luz que pasa a través de ellos, y se mide con un nefelómetro. Mejora la sensibilidad utilizando láser y agregando polietilenglicol a la solución, lo que aumenta el tamaño del agregado. Aplicación: estimación de inmunoglobulinas, componentes del complemento (C3, C4) y haptoglobina.

Muestra: sangre-suero. Busca el antígeno específico frente a un anticuerpo comercial añadido.

2) Precipitación en gel

Son las más utilizadas, en gel de agarosa. Como reacción, los reactivos se depositan en pocillos y se produce difusión a través del gel. En las zonas con concentraciones equiparables de antígeno y anticuerpo se forma un inmunocomplejo y aparecen líneas o bandas de precipitación visibles.

A) Doble difusión o reacción de Ouchterlony

Se utilizan dos pocillos: uno con solución antigénica y otro con suero en el que buscamos anticuerpos. En la zona de equivalencia se forma una banda de precipitación, que se sitúa más próxima al pocillo que contiene el componente menos concentrado. Aplicación: estudio de identidad entre antígenos.

Muestra: suero-sangre. Busca anticuerpos.

B) Inmunodifusión radial o técnica de Mancini

Consiste en la libre difusión de uno de los componentes de la reacción (antígeno o anticuerpo) por un gel que lleva incorporado el otro componente. La formación de complejos da lugar a anillos de precipitación cuyo diámetro es proporcional a la concentración del componente que difunde por el gel. Aplicación: cuantificación de fracciones plasmáticas de proteínas (anticuerpos, factores de coagulación).

Muestra: sangre-suero. Busca anticuerpos y antígenos específicos.

C) Inmunoelectroforesis

Combina la separación proteica por electroforesis con la inmunodifusión. Tras aplicar corriente, se separan los componentes y luego se produce difusión libre en gel de las fracciones obtenidas. La separación previa permite obtener arcos-bandas de precipitación que son exclusivos frente a una determinada fracción antigénica. Aplicación: identificación de fracciones proteicas específicas de una mezcla antigénica y determinación de la pureza de un antígeno.

Muestra: sangre-suero. Busca anticuerpos.

D) Inmunofijación

El suero problema se dispone en cinco carriles diferentes y se somete a electroforesis. Cada carril se recubre con antisuero específico. Cuando el anticuerpo reconoce el antígeno forma un precipitado que queda en el gel. Se debe lavar para eliminar las proteínas no precipitadas y teñir para identificar las proteínas que forman inmunocomplejos, identificando así el tipo de paraproteína. Aplicación: detección de afecciones como el mieloma múltiple y el linfoma.

Muestra: sangre-suero y orina. Busca paraproteínas (anticuerpos anómalos).

E) Contrainmunoelectroforesis

Busca una doble difusión forzada mediante la aplicación de un campo eléctrico. En gel de agar se elige un pH para que el anticuerpo tenga carga positiva o neutra y el antígeno carga negativa. Al aplicar voltaje, antígeno y anticuerpo se mueven uno hacia el otro y, en el punto de equivalencia, forman un inmunocomplejo y una línea de precipitación. Aplicación: determinación de anticuerpos antirrábicos.

Muestra: sangre-suero. Busca anticuerpos específicos contra Rhabdoviridae.

F) Electroinmunodifusión

Técnica cuantitativa: una inmunodifusión radial forzada por la aplicación de corriente eléctrica. Los antígenos se someten a electroforesis en un gel que lleva incorporado anticuerpo o suero, y forman precipitados en forma de cohete cuya altura es proporcional a la concentración de antígeno presente en el pocillo. Los valores desconocidos se determinan por interpolación en una curva patrón. Aplicación: cuantificación de inmunoglobulinas o detección de la concentración de proteínas plasmáticas (albúmina).

Muestra: sangre-suero. Busca anticuerpos.