Protocolos Esenciales de Laboratorio: Diagnóstico Microbiológico y Bioseguridad

Susceptibilidad Antimicrobiana: El E-Test

E-Test (Epsilon Test): Método para determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) alternativa a las técnicas de dilución. El antibiótico (AB) viene en tiras y se aplica sobre un soporte sólido con el microorganismo (MO) ya sembrado de manera radial. Se deja incubar un tiempo a temperatura (Tª) adecuada. Esta tira posee un gradiente de concentración. El punto donde el halo corta la tira es la CMI.

Diagnóstico Microbiológico de Enfermedades Infecciosas

Objetivo: Identificación del agente etiológico.

Métodos de Diagnóstico

• Diagnóstico Directo (Clásico/Rápido):
  1. Identificación de los microorganismos (cultivo y aislamiento) = Clásico.
  2. Identificación de productos microbianos específicos (toxinas, antígenos, etc.) a partir de la muestra (M) del lugar de infección = Rápido.
• Diagnóstico Indirecto (Rápido):
  3. Detección de anticuerpos (AC) específicos. Muestra: Sangre = Rápido.

Recolección y Transporte de Muestras Clínicas

Envases y Sistemas de Transporte de Muestras

• Investigación de Microorganismos Aerobios: Torundas con medio de transporte (de alginato de calcio, Dracon).
• Investigación de Microorganismos Anaerobios: Torundas con sistemas de transporte especiales para anaerobios (bolsas, viales).

Normas para la Recogida y Transporte de Muestras para Análisis Microbiológico

La muestra deberá ser representativa del proceso infeccioso (se tomará del lugar anatómico correcto).

• Se establecerán los momentos óptimos para la toma de la muestra.
• Deberán ser recogidas en cantidad suficiente y con la técnica adecuada.
• Se tomarán antes del comienzo del tratamiento (TTO).
• Se recogerá y transportará en recipientes adecuados.
• El recipiente con la muestra deberá estar rotulado de forma adecuada y se acompañará de un volante de petición.
• El transporte al laboratorio será rápido. En caso contrario, la muestra se almacenará de forma correcta.

Medios de Cultivo Selectivos y Diferenciales

Identificación de Gram Negativos y Lactosa Positivos

Medio MacConkey (MC)

Las sales biliares y el cristal violeta inhiben el crecimiento de Gram positivos. La lactosa que contiene el medio, si es fermentada por la acción de las bacterias, producirá ácidos que reaccionan con las sales biliares, dando un precipitado rojo-rosado.

Medio EMB (Eosina y Azul de Metileno)

Inhibe el crecimiento de Gram positivos y algunos Gram negativos. Es selectivo y diferencial. La fermentación de la glucosa precipita ambos colores al acidificar (ejemplos: E. coli, Salmonella).

Control de Calidad y Criterios de Rechazo

Control de Calidad en el Laboratorio

• Control Interno: Uso de cepas patrón y sueros con títulos de anticuerpos conocidos. Examen del propio laboratorio.
• Control Externo: Organismo ajeno al laboratorio que envía muestras a laboratorios independientes.

Elementos Sujetos a Control

Muestras clínicas, medios de cultivo, reactivos, tinciones, antisueros y otros productos comerciales, pruebas de sensibilidad, equipos, supervisión del personal.

Criterios de Rechazo de Muestras

• Muestras deficientemente identificadas o sin identificación.
• Transporte o conservación prolongados o inapropiados.
• Muestras derramadas.
• Muestras insuficientes o inadecuadas.

Bioseguridad y Terminología

Niveles de Bioseguridad del Laboratorio (Determinados por el Agente Biológico)

Agente Biológico: Microorganismos, con inclusión de los genéticamente modificados, cultivos celulares y endoparásitos humanos, susceptibles de originar cualquier tipo de infección, alergia o toxicidad.

• Grupo 1: Poco probables de causar enfermedad humana (ejemplo: Bacillus subtilis).
• Grupo 2: Puede causar enfermedad humana y supone peligro para el trabajador (ejemplos: Salmonella, Shigella).
• Grupo 3: Agente patógeno que causa enfermedad grave (ejemplo: Mycobacterium tuberculosis).
• Grupo 4: Agentes sin tratamiento ni profilaxis adecuada (ejemplo: Ébola).

Terminología Esencial

• Sensibilidad (SS): La cantidad más baja de microorganismo que puede ser detectada.
• Especificidad (ESPE): Habilidad del anticuerpo (AC) de reconocer a un único antígeno (AG).
• Efecto del AB: ¿Qué ocurre si un antibiótico es capaz de inhibir el crecimiento del MO? A mayor cantidad de AB, más lo inhibe, y habrá una determinada concentración de AB que inhibirá totalmente el crecimiento del MO (CMI).

Morfología y Objetivos de la Microbiología Clínica

Agrupaciones Bacterianas

Las agrupaciones se definen en función del plano de división de las bacterias.

• Cocos: Diplococo, Estreptococo, Sarcina, Estafilococo (Staphylococcus).
• Bacilos: Coccobacilo, Estreptobacilo, Diplobacilo, Único.

Objetivos del Laboratorio de Microbiología Clínica

Identificación del agente etiológico productor de una enfermedad infecciosa para:

1. Establecer la terapia: Pruebas de sensibilidad a antimicrobianos.
2. Pronosticar la evolución de la enfermedad.
3. Estudiar la epidemiología del proceso infeccioso.