Microbiología clínica: diagnóstico, etiología y características de los principales microorganismos

Mononucleosis infecciosa (virus de Epstein-Barr): Virus transmitido por la saliva. Una persona con infección activa puede presentar una infección subclínica y no desarrollar la enfermedad. Manifestaciones clínicas: fiebre, dolor de garganta, petequias en paladar blando y adenopatías. En personas inmunodeprimidas produce complicaciones. Es un virus oncogénico asociado a carcinoma nasofaríngeo, linfoma de células B y linfoma de Burkitt.

Diagnóstico: inmunológico (3 parámetros en sangre):

1. Linfocitos B atípicos en sangre periférica (frotis).
2. Anticuerpos antivirus de Epstein-Barr (AC con IFI o ELISA).
3. Prueba de Paul-Bunnell: se producen anticuerpos frente al virus que reaccionan con glóbulos rojos de carnero y caballo (antígeno) y los aglutinan. Estos anticuerpos no aparecen en niños menores de 4 años.

Etiología más comunes de meningitis:

• Meningitis agudas purulentas: Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae.
• Meningitis crónicas: Mycobacterium tuberculosis, Cryptococcus neoformans.
• Neonatales: transmisión perinatal o congénita (Escherichia coli).
• Meningitis asépticas: enterovirus, virus herpes simple, virus varicela-zóster.

Candida albicans: micosis sistémica.

Bordetella pertussis (Jean-Lowe): tos ferina.

Agar Schaedler: hemocultivo en anaerobiosis.

Listeria monocytogenes: prueba de Voges-Proskauer.

Vibrio parahaemolyticus: crece bien en medio alcalino.

Mycoplasma pneumoniae: carece de pared celular.

Rickettsia prowazekii: parásito intracelular obligado.

Staphylococcus aureus: piodermas.

Treponema pallidum: no crece en laboratorio.

Neisseria gonorrhoeae: modelo Thayer-Martin.

Mycobacterium tuberculosis: bacilo ácido-alcohol resistente.

Escherichia coli: meningitis en recién nacidos.

Streptococcus pneumoniae: reacción de Quellung.

Diagnóstico de tuberculosis

La muestra es esputo, que debe descontaminarse, fluidificarse y concentrarse. Los diagnósticos se basan en microscopía, cultivo e identificación. Su pared celular es muy compleja (rica en lípidos), lo que impide que se tiña bien con Gram. Son microorganismos ácido-alcohol resistentes (tinción rápida y eficaz, se tiñen de rojo); variantes: Ziehl-Neelsen o Kinyoun, y tinción por fluorescencia (auramina-rodamina o naranja de acridina). Lo ideal después es sembrar.

• Medio de cultivo: Löwenstein-Jensen. Crecimiento muy lento: 8 semanas a 35-37 ºC. Tiene requerimientos especiales, por lo que solo se usan tinción o métodos indirectos. Forma colonias rugosas características.
• Métodos indirectos: métodos serológicos y prueba tuberculínica (reacción de Mantoux), que sirve para saber si hemos tenido contacto. Se inocula intradérmicamente en antebrazo. Si es positiva puede ser una reacción de hipersensibilidad retardada: aparece una mácula, indicando contacto con el microorganismo, pero no enfermedad. Si es positiva, se complementa con estudio de esputo.
• Prueba de gamma interferón.

Etiología de la infección urinaria

Los microorganismos que causan infecciones urinarias proceden del tracto intestinal, salen con las heces y, a través del recto, ascienden por vía ascendente hasta las vías urinarias. La etiología varía según el tipo de paciente:

1. Enfermos sin factores de riesgo o enfermedad base: Gram negativos (70 % Escherichia coli, Klebsiella spp., Proteus mirabilis) y Gram positivos (Enterococcus faecalis).
2. Pacientes hospitalizados (cualquier microorganismo): Escherichia coli, Enterobacter spp., Serratia spp.

Familia Vibrionaceae

Bacilos Gram negativos, curvados, móviles, anaerobios facultativos, catalasa y oxidasa positivos, que fermentan la glucosa. Incluye Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus y V. vulnificus. Microscopía: campo oscuro o contraste de fases; el vibrión se observa con movimientos rápidos.

Aislamiento del microorganismo:

1. Siembra en agua de peptona alcalina y 3 % de NaCl (medio de enriquecimiento).
2. Incubación en aerobiosis 3-6 horas a 35-42 ºC; si crece en estas condiciones, es seguro que se trata de Vibrio.
3. Subcultivo en agar TCBS (tiosulfato citrato bilis sacarosa, que inhibe el crecimiento de la flora): medio selectivo.
4. Incubación en aerobiosis 3-6 horas a 35 ºC.

Mecanismos de acción de la gastroenteritis (diarreas típicas):

1. Mecanismo toxigénico (bacterias toxigénicas): colonizan principalmente el intestino delgado y se multiplican en él. Al liberar enterotoxinas producen daño en el intestino (Vibrio cholerae y Escherichia coli), sin alterar la estructura de la mucosa intestinal. Diarreas acuosas, abundantes y secretoras.
2. Mecanismo invasivo: no producen toxinas; una vez alcanzan el tracto intestinal llegan al colon, se multiplican en él y producen inflamación, ulceración y microabscesos (Salmonella enterica, Shigella sp., Yersinia enterocolitica). Da lugar a diarrea invasiva o disentería: cuadro con inflamación del tracto gastrointestinal y presencia de mucosidad, sangre y pus en heces, acompañado de dolor y fiebre.

Intoxicación alimentaria: enfermedades causadas por microorganismos que se multiplican en los alimentos, pero que no producen una infección significativa en el ser humano. La patología se debe a las toxinas producidas por los microorganismos. El diagnóstico se basa en el aislamiento del microorganismo a partir del alimento o en la detección de la toxina en heces. Etiología: intoxicación por Staphylococcus aureus, botulismo, intoxicación por Clostridium perfringens, intoxicación por Bacillus cereus e intoxicación por micotoxinas.

Diagnóstico indirecto de brucelosis:

1. Prueba de rosa de Bengala: reacción antígeno-anticuerpo; se tiñe el microorganismo con colorante rosa de Bengala. Si aglutina, es positiva: el paciente tiene anticuerpos antibrucela, en fase aguda o crónica. Si no aglutina, no se sigue. Es rápida, específica y sencilla.
2. Seroaglutinación en tubo o Wright: se titula el anticuerpo del paciente en medio líquido. Si es menor de 160, el paciente no sufre enfermedad (zona endémica). Si es mayor de 160, el paciente sufre enfermedad aguda.
3. Coombs antibrucelosis: anticuerpos no aglutinantes que dan reacciones serológicas. En la fase crónica desaparecen los anticuerpos aglutinantes y solo aparecen los no aglutinantes. Si es positiva, indica brucelosis; si es positiva en dos ocasiones, indica fase aguda.
4. ELISA: prueba complementaria (IgM e IgG).

Diagnóstico de hepatitis C: los anticuerpos aparecen a las 4-6 semanas.

• Inmunoblot: antígenos recombinantes absorbidos en tiras de nitrocelulosa. Positivo si hay reacción frente a 2 o más antígenos de regiones diferentes del genoma vírico; negativo si hay ausencia total de reacción.
• ELISA: utiliza péptidos sintéticos de tercera generación como antígeno.
• Detección de ARN vírico en sangre por PCR.

Vías de infección del sistema nervioso central (SNC): hematógena; extensión por contigüidad (otitis media, sinusitis, infección de cuello y cabeza); implantación directa de los microorganismos (traumatismos, heridas, malformaciones congénitas); intraneural y perinatal.

Diagnóstico serológico del sida

Pruebas de detección de anticuerpos frente al VIH: primero se realiza un cribado de anticuerpos con pruebas de detección de primera generación o rápidas y, si son positivas, se confirma mediante Western blotting.

1.º Cribado de anticuerpos:

• Pruebas rápidas (sencillas, rápidas y económicas; lecturas subjetivas y dudas de interpretación): inmunocromatografía capilar, DOT-EIA de primera y segunda generación.
• Pruebas de detección (siempre obligatorias; cada generación requiere menos tiempo). Combinación EIA e inmunofluorescencia, que aumenta especificidad y sensibilidad. No hay que pasar por rápidas, son caras.
  • EIA de 1.ª generación: antígeno vírico ligado, peligro en la manipulación.
  • EIA de 2.ª generación: antígenos son secuencias conservadas en un laboratorio, péptido recombinante o sintético; menos tiempo.
  • EIA de 3.ª generación: igual que la 2.ª pero con menos tiempo.
  • EIA/ELFA de 4.ª generación (actual): se detectan anticuerpos y antígenos (péptido recombinante o sintético y anticuerpos para detectar el antígeno p24, que está en suero a los 13-15 días). Conviene acortar el periodo, ya que cuanto antes se detecta, menor es la carga viral y más se alarga la vida. Muy específica y permite adelantar el diagnóstico del enfermo.

2.º Pruebas de confirmación (muy específicas): inmunofluorescencia indirecta, PCR, radioinmunoprecipitación y Western blotting. El antígeno es proteico y estructural del VIH: mediante electroforesis separamos las proteínas del VIH que actúan como antígenos y las ponemos en contacto con el suero del paciente. Debe haber una reacción cruzada y al menos 2 antígenos diferentes del virus, como gp120, gp160 y gp41.

Categorías del sida:

• Categorías clínicas: Grupo A (pacientes asintomáticos, con infección aguda por VIH o con linfadenopatías persistentes generalizadas); Grupo B (pacientes con enfermedad por VIH sintomática que no indican sida); Grupo C (pacientes con enfermedad que indica sida).
• Categorías inmunológicas: Grupo 1 (más de 500 CD4/mL); Grupo 3 (menos de 200). El paciente tiene sida cuando presenta categoría clínica C (C1, C2, C3) y categoría inmunológica del grupo 3 (A3, B3, C3).

Neisseria gonorrhoeae:

• Exudados: se toman 2 muestras de exudado: uretral con torunda específica para que no se deseche, o cervical, vaginal y uretral con espéculo. También se puede tomar exudado rectal o faríngeo.
• Transporte: menos de 2 horas, ya que es muy sensible a la desecación. No resiste bajas temperaturas ni desecación; nunca congelar.
• Medio de cultivo: Thayer-Martin con 10 % de CO₂ y ambiente húmedo, con suplemento vitamínico, factor de crecimiento y antibióticos.
• Características: colonias pequeñas y brillantes; diplococos Gram negativos; oxidasa y catalasa positivos; oxida la glucosa y la maltosa.