Guia completa sobre mètodes cromatogràfics

Mètodes cromatogràfics

La cromatografia és una tècnica general utilitzada per separar, identificar i quantificar els components d'una mescla. Els components circulen en una fase estacionària (fase e) impulsats pel flux d'una fase mòbil (fase m). La separació es produeix a causa de la diferent mobilitat de cada component en la fase estacionària quan la mescla és arrossegada per la fase mòbil.

Classificació de la cromatografia

1. Estat físic de les fases:
   • Fase mòbil: Líquid, gas o fluid supercrític.
   • Fase estacionària: Sòlid o líquid.
2. Tècnica de treball: Cromatografia en paper, en capa fina o en columna.
3. Finalitat: Preparativa o analítica.
4. Mecanisme físic o químic:
   • Cromatografia de distribució o partició: Fase estacionària líquida (o sòlid dissolt en una fase líquida enllaçada a la superfície de la columna). Es basa en l'equilibri de distribució del solut entre la fase estacionària líquida i la mòbil.
   • Cromatografia d'adsorció: Separació deguda a les diferents propietats d'adsorció dels components en una fase estacionària sòlida.
   • Cromatografia d'intercanvi iònic: Fase estacionària sòlida (resina d'intercanvi d'anions o cations) que reté els ions segons la seva càrrega.
   • Cromatografia d'exclusió molecular: Separació per mida; les partícules petites penetren als porus, mentre que les grans són excloses.
   • Cromatografia d'afinitat.

Cromatografia en paper i en capa fina

S'utilitza per a l'anàlisi qualitativa (identificar components mitjançant la comparació de valors Rf respecte a patrons). Els passos són:

1. Aplicació de la mostra.
2. Desenvolupament del cromatograma (en cubeta).
3. Revelat: identificar els diferents components separats.

Cromatografia en columna

S'utilitza un cromatògraf d'elució en columna (l'eluent entra i l'eluat surt). El detector transforma en un senyal elèctric mesurable qualsevol canvi que pateix la fase mòbil en passar el solut. L'anàlisi es realitza a partir del cromatograma:

• Anàlisi qualitativa: Posició dels pics a l'eix del temps (temps de retenció).
• Anàlisi quantitativa: Àrea dels pics (varia linealment amb la concentració).

Cromatografia de gasos

Existeixen dos tipus principals:

• GLC (Gas-Líquid): Fase mòbil gasosa i fase estacionària líquida. Mecanisme: partició.
• GSC (Gas-Sòlid): Fase mòbil gasosa i fase estacionària sòlida. Mecanisme: adsorció.

La fase mòbil és un gas portador inert (He, N₂, Ar...). La mostra es volatilitza i s'injecta en la columna. La fase mòbil no interacciona amb l'analit, només el transporta.

Requisits dels compostos

Han de ser volàtils, amb un punt d'ebullició inferior a 400 ºC i ser gasos.