Glucidos1
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Prueba de la ninhidrina: Reacción para la detección de aminoácidos, actualmente acoplada a sistemas de valoración automática. La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) es un oxidante energético que por una desaminación oxidativa de los aminoácidos conduce a la formación del aldehído correspondiente, con liberación de amoniaco y gas carbónico y formación de la ninhidrina reducida o hidrindrantina. La molécula de hidridantina, en presencia de otra de ninhidrina, condensa a través del amoniaco produciendo una estructura denominada indanona o púrpura de Ruhemann, manifestando un color rojizo, excepto para la prolina, hidroxiprolina y en menor medida para la histidina. Presenta su máximo de absorbancia a los 570 nm, exceptuando los tres aminoácidos reseñados anteriormente
La ninhidrina, un agente oxidante poderoso, reacciona con todos los a-aminoácidos a un pH entre 4 y 8 para dar un compuesto de color violeta. Está reacción se efectúa también con aminas primarias y amoníaco pero sin desprendimiento de CO2. Los Iminoácidos prolina e hidroxiprolina también reaccionan con la Ninhidrina, pero en este caso se obtiene un color amarillo en vez del violeta.
Las reacciones implicadas son las siguientes:
NINHIDRINA + AMINOACIDO --------------- HIDRINDANTINA + ALDEHIDO + CO2+ NH3
HIDRINDANTINA + NH3 + NINHIDRINA ------------- COMPLEJO DE COLOR VIOLETA + AGUA
La ninhidrina es un reactivo usado para ver las manchas de bandas de aminoácidos separados por cromatografía o electroforesis. La ninhidrina reacciona con el aminoácido dando como producto un anión color violeta intenso, llamado púrpura de Ruhemann, que se estabiliza por resonancia. En esta reacción se pierde la cadena lateral en forma de aldehído. Esta reacción sirve para detectar aminoácidos en varios sustratos. (Wade 1993)
Tiene como objetivo detectar y cuantificar cantidades de aminoácidos libres. Los aminoácidos, en general reaccionan con la ninhidrina (hidrato de hicelohidrandeno) cuando son calentados con un exceso de la misma. Todos los aminoácidos que poseen un grupo amino libre reaccionan y forman dióxido de carbono, amoníaco y un aldehído que contiene un átomo de carbono menos que el compuesto original. Esta reacción da lugar a la formación de un producto color azul o púrpura (que posteriormente puede ser utilizado para cuantificar el aminoácido). En el caso de la prolina, que estructuralmente no posee el grupo amino libre, sino un grupo imino, la coloración final es amarilla. El amoníaco, la mayoría de los polipéptidos y las proteínas pueden desarrollar coloración en esta reacción, pero a diferencia de los aminoácidos, no liberan CO 2 . Recuerde que la coloración azulada o violeta será proporcional a la concentración del aminoácido. 1. Pueba del Lugol.
El lugol o solución de Lugol es una solución de I2 (1%) en equilibrio con KI (2%) en agua destilada. Fue nombrada en honor al médico francés J. G. A. Lugol. Este producto se emplea frecuentemente como desinfectante y antiséptico, para cubrir deficiencias de yodo, y para la desinfección de agua en emergencias. n microbiología, es empleado en la tinción de Gram para retener el colorante cristal violeta. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta. JHA Este reactivo reacciona con algunos polisacáridos como los almidones, glucógeno y ciertas dextrinas, formando un complejo de inclusión termolábil que se caracteriza por ser colorido, dando color diferente según las ramificaciones que presente la molécula. l yoduro de potasio es agregado para aumentar la solubilidad del yodo diatómico por formación del anión triatómico I3-.
Además se utiliza como antiséptico y en determinación de algunos polisacáridos, como el almidón o el glucógeno. Frente a la presencia de estos, vira al color negro-morado. En solución acuosa, la amilosa forma estructuras helicoidales lineales y la amilopectina ramificadas, gracias a la formación de puentes de H entre los grupos OH de la glucosa y las moléculas de H2O. Si a una dislución de almidón de le añade I, esta toma un color azul intenso. Esta característica es específica del almidón, debido a su estructura, y se debe a la adsorción del I por las cadenas helicoidales, especialmente de la amilosa. Por tanto no es una reacción química, sino una interacción física reversible por métodos físicos. Esto se puede comprobar fácilmente, pues al calentar la mezcla, el color azul desaparece, y al enfriarla vuelve a aparecer.
La ninhidrina, un agente oxidante poderoso, reacciona con todos los a-aminoácidos a un pH entre 4 y 8 para dar un compuesto de color violeta. Está reacción se efectúa también con aminas primarias y amoníaco pero sin desprendimiento de CO2. Los Iminoácidos prolina e hidroxiprolina también reaccionan con la Ninhidrina, pero en este caso se obtiene un color amarillo en vez del violeta.
Las reacciones implicadas son las siguientes:
NINHIDRINA + AMINOACIDO --------------- HIDRINDANTINA + ALDEHIDO + CO2+ NH3
HIDRINDANTINA + NH3 + NINHIDRINA ------------- COMPLEJO DE COLOR VIOLETA + AGUA
La ninhidrina es un reactivo usado para ver las manchas de bandas de aminoácidos separados por cromatografía o electroforesis. La ninhidrina reacciona con el aminoácido dando como producto un anión color violeta intenso, llamado púrpura de Ruhemann, que se estabiliza por resonancia. En esta reacción se pierde la cadena lateral en forma de aldehído. Esta reacción sirve para detectar aminoácidos en varios sustratos. (Wade 1993)
Tiene como objetivo detectar y cuantificar cantidades de aminoácidos libres. Los aminoácidos, en general reaccionan con la ninhidrina (hidrato de hicelohidrandeno) cuando son calentados con un exceso de la misma. Todos los aminoácidos que poseen un grupo amino libre reaccionan y forman dióxido de carbono, amoníaco y un aldehído que contiene un átomo de carbono menos que el compuesto original. Esta reacción da lugar a la formación de un producto color azul o púrpura (que posteriormente puede ser utilizado para cuantificar el aminoácido). En el caso de la prolina, que estructuralmente no posee el grupo amino libre, sino un grupo imino, la coloración final es amarilla. El amoníaco, la mayoría de los polipéptidos y las proteínas pueden desarrollar coloración en esta reacción, pero a diferencia de los aminoácidos, no liberan CO 2 . Recuerde que la coloración azulada o violeta será proporcional a la concentración del aminoácido. 1. Pueba del Lugol.
El lugol o solución de Lugol es una solución de I2 (1%) en equilibrio con KI (2%) en agua destilada. Fue nombrada en honor al médico francés J. G. A. Lugol. Este producto se emplea frecuentemente como desinfectante y antiséptico, para cubrir deficiencias de yodo, y para la desinfección de agua en emergencias. n microbiología, es empleado en la tinción de Gram para retener el colorante cristal violeta. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta. JHA Este reactivo reacciona con algunos polisacáridos como los almidones, glucógeno y ciertas dextrinas, formando un complejo de inclusión termolábil que se caracteriza por ser colorido, dando color diferente según las ramificaciones que presente la molécula. l yoduro de potasio es agregado para aumentar la solubilidad del yodo diatómico por formación del anión triatómico I3-.
Además se utiliza como antiséptico y en determinación de algunos polisacáridos, como el almidón o el glucógeno. Frente a la presencia de estos, vira al color negro-morado. En solución acuosa, la amilosa forma estructuras helicoidales lineales y la amilopectina ramificadas, gracias a la formación de puentes de H entre los grupos OH de la glucosa y las moléculas de H2O. Si a una dislución de almidón de le añade I, esta toma un color azul intenso. Esta característica es específica del almidón, debido a su estructura, y se debe a la adsorción del I por las cadenas helicoidales, especialmente de la amilosa. Por tanto no es una reacción química, sino una interacción física reversible por métodos físicos. Esto se puede comprobar fácilmente, pues al calentar la mezcla, el color azul desaparece, y al enfriarla vuelve a aparecer.