Bioqui

3ª AULA: Reações Qualitativas para Identificação de Aminoácidos
Objetivo: Identificar e caracterizar diferentes aminoácidos através de reações específicas.
1. Reação de Ninidrina:
Fundamento teórico: A ninidrina é um agente oxidante que reage com grupos amino livres de
aminoácidos, peptídeos e proteínas desde que o pH da solução esteja entre 4 e 8, dando origem à púrpura de Ruhemann, de cor arroxeada (a intensidade da cor é proporcional a concentração de aas livres). A reação também ocorre com aminas primárias e amônia, porém sem liberação de CO2. Os aminoácidos (prolina e hidroxiprolina) também reagem com a ninidrina, porém neste caso, por possuírem o grupo a-amino substituído obtém-se um produto de cor amarela.
Reativos: ninidrina 1% (é tóxica) ou ninidrina a 0,2% em tampão fosfato 7,0, solução de proteína (albumina, leite, clara de ovo), solução de aminoácidos 0,05 M (glicina, prolina, hidroxiprolina, etc.).
Técnica.
Tubos Amostra/Concentração Volume (mL) Solução de ninidrina (0,1%)
1 Água destilada 1,0 1,0 mL -
2 Glicina 0,05 M 1,0 1,0 mL +
3 Prolina 0,05 M 1,0 1,0 mL -
4 Sol. de proteína 1,0 1,0 mL +
Aquecê-los em banho-maria 100ºC por 3 minutos. Compare os resultados com o tubo 1. Anote os resultados e explique-os. Tubo 1 - incolor; Tubo 2 - levemente lilás; Tubo 3 - amarelo; Tubo 4 - púrpura.

2. Reação Xantoprotéica:
Fundamento teórico: as proteínas que possuem grupamentos fenil reagem com HNO3, formando nitro-derivado fortemente coloridos em meio alcalino. Os aminoácidos como a tirosina e triptofano dão teste positivo com o aparecimento de cor amarelo-alaranjado, o anel simples de benzeno da fenilalanina não tem capacidade de positivar a reação.

Reativos: HNO3 concentrado, NaOH 20%, solução de proteína (albumina, leite, clara de ovo),
solução de aminoácidos 0,05 M (tirosina, triptofano, fenilalanina e glicina).
Técnica.
Tubos Amostra/Concentração Volume (mL) HNO3 concent.
1 Água destilada 1,0 1,0 mL -
2 Glicina 0,05 M 1,0 1,0 mL -
3 Tirosina 0,05 M 1,0 1,0 mL +
4Triptofano 0,05 M 1,0 1,0 mL +
5Fenilalanina 0,05 M 1,0 1,0 mL -
6 Sol. de proteína 1,0 1,0 mL +
Aquecer em banho-maria por 1 minuto todos os tubos e acrescentar 3 mL de NaOH 20%. Anote osresultados e explique-os. Tubo 1 - incolor; Tubo 2 - incolor; Tubo 3 - levemente alaranjado; Tubo 4 - laranja forte; Tubo 5 - incolor; Tubo 6 - alaranjado.

3. Reação de Millon:
Fundamento teórico: Reação devido à presença do grupamento hidroxifenil (C6H5-OH) nas
moléculas de proteínas e peptídeos. Reação positiva para tirosina com o aparecimento de cor
avermelhada com ou sem precipitado.
As proteínas são precipitadas pelos ácidos minerais fortes (HNO3) e pelo mercúrio, os quais
com aquecimento tornam uma coloração avermelhada. Com solução de aminoácidos, sob as mesmascondições produz somente uma coloração avermelhada.

Reativo: Reativo de Millon (Hg+HNO3), solução de proteína (albumina, leite, clara de ovo), soluçãode aminoácidos 0,05 M (glicina tirosina e triptofano).
Técnica.
Tubos Amostra/Concentração Volume (mL) Reativo de Millon
1 Água destilada 1,0 1,0 mL -
2 Glicina 0,05 M 1,0 1,0 mL -
3 Tirosina 0,05 M 1,0 1,0 mL -
4Triptofano 0,05 M 1,0 1,0 mL +
5 Sol. de proteína 1,0 1,0 mL -

Aquecê-los em banho-maria 100ºC por 3 minutos. Compare os resultados com o tubo 1.
Anote os resultados e explique-os. Tubo 1 - incolor; Tubo 2 - incolor; Tubo 3 - alaranjado (único que reage com o reativo de millon); Tubo 4 - marrom; Tubo 5 - esponja amarela e líquido amarelo (não reage, pois não tem tirosina na composição).