Hibridación de ácidos nucleicos: desnaturalización, renaturalización y curvas Cot

Resumen

El texto explica la hibridación de ácidos nucleicos, la unión de dos cadenas monocatenarias complementarias para formar una molécula bicatenaria. Describe las sondas y secuencias diana, y los procesos de desnaturalización y renaturalización, con sus curvas y el concepto de temperatura de fusión (Tm). También incluye las curvas Cot y su diferencia entre genomas procariotas y eucariotas.

Puntos clave

La hibridación es la unión de dos moléculas monocatenarias de ácidos nucleicos complementarias, formando una molécula híbrida bicatenaria.
Una sonda es una secuencia de nucleótidos complementaria a la secuencia diana que se pretende detectar, y debe marcarse para su detección.
La desnaturalización separa las dos cadenas de una molécula bicatenaria por la rotura de los puentes de hidrógeno, y se sigue midiendo la absorbancia a 260 nm.
La Tm es la temperatura a la que se desnaturaliza el 50 % de la molécula; aumenta con el número de pares de bases y con el porcentaje de pares GC.
La renaturalización es la unión de cadenas complementarias; su velocidad aumenta con la concentración de ADN y se describe mediante el valor Cot½.
En eucariotas aparecen secuencias altamente repetidas, moderadamente repetidas y únicas, que se renaturalizan a velocidades distintas; en procariotas no hay secuencias repetidas.

Ponte a prueba

Hibridación uníón de 2 moléculas monocatenarias de ácidos nucleicos Por la complemantariedad de las secuencias originando una mol hibrida Bicatenaria técnicas de hibridación permiten detectar secuencias concretas de ac Nucleicos mediante el empleo de sondas marcadorasSECUENCIA DIANA secuencia concreta de BN que se pretende detectar SONDA secuencia de nucleótidos cuyas BN Sonb complementarias a la secuencia diana
LAS Técnicas DE HIBRDCN
SE DIF ac nucleico a detctar sonda a utilizar Marcaje de la sonda y el medio o soporte Desnaturalizaciónpropiedad del ADN consiste en la separacio de La cadena bicatenaria en 2 monocatenarias por la roptura de los pnts de HCURVA DE Fusióncurva sigmoide obtenida al Medir la absorbancia a 260 nm de una molécula bicatenaria de ADN en función de La temperatura 3 ZONAS 1 ZONA tramo Sin pendiente la temperatura en esta zona no es suficiente para desnaturalizar Y el % de desnaturalización es 0 2 ZONA Aumento de la absorbancia a medida que aumenta la temperatura si produce EFECTO
HIPERCROMICO aumento de la absorbancia a medida que la molécula se Desnaturaliza3
ZONA recta de Pendiente casi nula ya qu ele porcentaje de ADN desnaturalizado es 100%Tª DE Fusión
Tm teperatura a la que la desnaaaturalizacion es del 50 % en moléculas De menos de 500 pba mayor numero de Pares de bases mayor Tm pero en mol de mayor tamaño a mayor porcentaje de pares De GC mayor Tm RENATURALIZACION proceso En el cual las dos mol de ADN bicatenario se unen formando 1 bicatenaria Cinética DERENATURALIZACIONpara que se Produzaca este proceso las cadenas tienen que chocarse A mayor concentración de ADN maor velocidad de renaturalizacion
Cuando las mol monocatenarias se Encuentran se produce fase de nucleacion las bases complementarias forman pnts De H Cierre en cremallera cierre de las secuencias vecinas originando la soble HeluiceVEL DE RENATURALIZACION
CVURVAS DE RENATURALIZACION representación del ADN renaturalizadofrente al log CoT
GENOMAS PROCARIOTAS grandes moléculas sin secuencias repetidas
COT1/2 valor en El que la renaturalizacion es del 50% a mayor complejidad mayor COT ½ la vel de renatura es inversamente Proporcional a la complejidad de la molécula GENOMAS EUCARIOTAS grandes oleculas Con secuencias repetidas tienen secuencias altamente repetidas moderadamente Repetidas y secuencias únicas por esta razón se observan 3 fases a secuencias Altamente repetidas renatu rápidamente moderadamente repetidas renatu mas lento Secuencias únicas renatu lenta

Preguntas frecuentes

¿Qué es la temperatura de fusión (Tm) del ADN?

La Tm es la temperatura a la que el 50 % de las moléculas bicatenarias de ADN se han desnaturalizado. Aumenta con el tamaño de la molécula (hasta 500 pb) y con el porcentaje de pares GC.

¿Qué es una sonda en una técnica de hibridación?

Una sonda es una secuencia de nucleótidos complementaria a la secuencia diana que se quiere detectar. Se marca para poder identificar la hibridación.

¿Por qué aumenta la velocidad de renaturalización con la concentración de ADN?

Para que se produzca la renaturalización las cadenas tienen que chocar entre sí. A mayor concentración de ADN, mayor probabilidad de choque y mayor velocidad.