Tinción de parásitos

P1: OBJETIVO : Evaluar la presencia o ausencia de parásitos gastrointestinales en muestras de heces de procedencia desconocida con el fin de determinar el valor diagnóstico de técnicas coprológicas directas cualitativas y cuantitativas.

Examen Microscópico:

  dos tipos de técnicas o métodos para el análisis parasitológico de las heces:

Métodos directos:

Permiten observar formas vegetativas de protozoos (trofozoitos de amebas) y ooquistes de coccidios. Es útil en las necropsias, para analizar el contenido intestinal. Huevos de algunos nemátodos como Enterovius. 

Método de enriquecimiento o concentración

Sirve para concentrar las formas parasitarias (huevos, larvas) en las heces, de manera que puedan ser diagnosticadas, aún cuando existan pequeñas cantidades de huevos. Pueden ser: Cualitativos (flotación o sedimentación) o Cuantitativos (Método de McMaster)

En las preparaciones húmedas con solución salina pueden observarse: Huevos y larvas de helmintos, Trofozoitos amebianos: redondos o irregulares, Trofozoitos de flagelados: suelen ser piriformes y Quistes.

En preparaciones húmedas con Yodo pueden observarse quistes de amebas y flagelados pero no son refringentes. El citoplasma del quiste se tiñe de amarillo –marrón claro y El núcleo de marrón oscuro.

La preparación con azul de metileno amortiguado (AMA)
es de gran utilidad para la identificación y clasificación de trofozoitos amebianos.

P2: OBJETIVO: Valorar la utilidad diagnóstica de diferentes tipos de técnicas de concentración de parásitos en muestras de heces comparando los resultados obtenidos e identificando las principales ventajas e inconvenientes de cada una de ellas.

Existen dos tipos de técnicas: La sedimentación de parásitos (formol-éter) intestinales en heces se logra por centrifugación ligera (lavar con 10ml formalina 10%, y agregar 3ml de acetato etílico al tubo antes de centrifugar) o por gravedad del material fecal, conduciendo a la recuperación de todos los protozoos, huevos y larvas, especialmente huevos de trematodos. Por el contrario, los trofozoitos de protozoos no se verán ya que el procedimiento los destruye.

¿Crees que las técnicas utilizadas en esta práctica son técnicas objetivas?: no, ya que se tratan muestras de forma imprecisa. Se analiza solo una parte (no mucha precisión, es importante homogeneizar para repartir los parásitos), también posibles errores de interpretación por el investigador. Es subjetiva, pero aun así rápida.

Los métodos de concentración por flotación se fundamentan en la separación de las estructuras parasitarias mediante el empleo de soluciones de densidad intermedia, que permite la flotación de huevos y/o quistes y la sedimentación de restos fecales. Este método no es conveniente para la obtención de trofozoitos o de larvas de nemátodos cuyas estructuras se alteran por las soluciones empleadas. Por su sencillez y eficacia llevaremos a cabo la técnica de Willis-Molloy.

¿Crees que la técnica de flotación de Willis-Molloy es más eficiente que la técnica de Richie? No, es de mayor eficacia la técnica de Richie ya que se observa mayor concentración de parásitos.

P3:TÉCNICA DE McMASTER
MODIFICADA.OBJETIVO: Valorar la eficacia de las técnicas cuantitativas en el diagnóstico de parásitos identificando su base científica, sus limitaciones y puntos fuertes. Principalmente para determinar la intensidad de la infección por helmintos y se basan en la cuantificación del número de huevos por gramo o mg de materia fecal, estas técnicas son útiles en estudios clínicos y epidemiológicos para determinar el grado de infección y evaluar la eficacia de los tratamientos.

La técnica McMaster utiliza cámaras de recuento (figura 4) que posibilitan el examen microscópico de un volumen conocido de suspensión fecal (2 x 0.15 ml). Tiene dos compartimentos, cada uno marcado con una rejilla sobre la superficie superior. Cuando la cámara se rellena con una suspensión de heces en fluido de flotación (sulfato de magnesio, sulfato de zinc, nitrato de sodio), muchos de los detritos se irán al fondo mientras los huevos flotan hacia la superficie, en donde pueden ser fácilmente vistos y cuantificados.

¿Crees que la técnica es sensible? ¿Y específica? Si, es sensible ya que la disolución preparada esta bastante concentrada tras filtrar con la disolución salina. Así pues, si hay huevos se observaran seguro en alguna de las celdas. No es especifica ya que el diagnóstico de la prueba puede salir negativo.

P5: OBJETIVOS:
Familiarizarse con las técnicas de uso habitual en el diagnóstico de protozoos parásitos de la sangre de interés sanitario. El procedimiento más sencillo es el estudio microscópico de extensiones sanguíneas. Los parásitos que se diagnostican son: Plasmodium spp. Microfilarias y Tripanosoma spp. dos procedimientos fundamentales: La extensión en capa fina es útil para el estudio en detalle de los hematíes y de los parásitos de la sangre, su principal limitación es que la cantidad de sangre presente en la muestra es pequeña. La extensión gruesa resulta útil para el diagnóstico rápido de las parasitemias demasiado leves para apreciarse en la extensión fina, pero no sirve para estudios anatómicos finos ya que durante el procedimiento se rompen los eritrocitos.

P6: De un modo general en los mataderos se realiza la detección directa del primer estadío larvario trichinella spiralis e ictioparasitos (L 1 enquistada) en tejido muscular a través de la inspección post-morten y comprende 2 técnicas:

Triquinoscopía directa

El procedimiento consiste en la inspección visual de pequeñas muestras de tejido muscular comprimido entre 2 vidrios gruesos (triquinoscopio) para la posterior observación al donde se podrán visualizar los quistes con las larvas espiraladas en su interior.

¿consideras que este procedimiento es eficiente para su uso en matadero si una canal porcina pesa como promedio 150 kg? Es eficiente en cuanto a la rapidez y sencillez, pero conlleva demasiada imprecisión en muestras de gran cantidad de carne ya que puedes observar muestras que no contengan parasitemia. (falso negativo).

Técnica de digestión artificial o enzimática

La técnica de digestión enzimática trata de reproducir in vitro la digestión estomacal, con el objeto de provocar la liberación de las larvas de Trichinella que pudieran hallarse dentro de quistes en el tejido muscular analizado.

¿consideras que este procedimiento es más o menos eficiente para su uso a gran escala que el método directo? Mas eficiente ya que al triturar la carne obtienes una muestra mas representativa del total de carne.

P7: Entre las técnicas más utilizadas como herramienta de screenig se encuentran las técnicas de aglutinación de partículas de látex sensibilizadas con antígeno toxoplásmico.
Permite identificar la presencia de anticuerpos específicos IgG e IgM frente a toxoplasma en el suero del paciente. Esta técnica es barata y rápida y permite realizar un primer cribado de la población

La determinación inmunoenzimatica cuantitativa de anticuerpos específicos contra Toxoplasma gondii se basa en la técnica del ELISA (Enzym linked Immunosorbent Assay). Las tiras de micropocillos que se usan como fase sólida están recubiertas con antígenos específicos de Toxoplasma gondii. Los anticuerpos existentes en la muestra unen a los antígenos inmovilizados de la placa de micro titulación. El conjugado de anticuerpos se une con los complejos antígeno-anticuerpo en muestras positivas. Desarrollan una coloración azul después de incubarlos con sustrato de tetrametilbenzidina (TMB). Finalmente se añade ácido sulfúrico para detener la reacción, causando un cambio de coloración de azul a amarillo. La densidad óptica se mide con un lector de ELISA a 450nm