Test de bencidina

Al salir la prueba reactiva se tiene que enviar a lima para que se confirme por el western blot o southern blot.

PARTE Biólogo

ELISA :

*Puede detectar hormonas

*Confirmativo :

Western Blot y la clínica

*ACTUALMENTE SE UTILIZA LA Generación 4 de

ELISA DEMORA 30 días , acorta el tiempo de periodo de ventana o incubación .

*LA Generación 2

DE ELISA DEMORA 6 MESES .

REACTIVOS :

--Solución lavado

--Solución buffer

--Solución stop

--Solución conjugado

--Solución control de muestra

En los casos en que el HBsAg esté presente en la muestra, se desarrolla color celeste que vira al amarillo cuando se detiene la reacción con ácido sulfúrico.

Como  :

(1)

Agregar Control (+):
rojo

Agregar Control (+):
amarillo

Agregar Control (-):

verde

Muestra a utilizar :

SUERO(mas utilizado) O PLASMA

* los REACTIVOS SE CONSERVA

N A 4°C , cuando nose utiliza

--10-15 minutos en uso a temperatura ambiente

(2)

*se debe RECONSTITUIR DOS REACTIVOS :

HOFILIZADO

--R7Ase le agrega R7B, son fotosensibles , SE DEBE dejar reposar por media hora y luego agitar

(3)

*Ya atemperado y agitado

--96 pruebas , dura para un mes . Si sobre pasa ese tiempo se descarta .

(4)ESTRATEGIA DE TRABAJO

(5)Los posos se utilizan por paciente

PROCEDIMIENTOS :

1)solución conjugado + muestra del paciente

--hechar 25  µL de la sangre del paciente mas 100 µL del conjugado .

--Incubar  a temperatura 37°C ( durante 1 hora) esperando que reaccione el antígeno y anticuerpo.

*en los posillos tienen adherido el antígeno en las paredes

2) utilizar TMB (fotosensible)
, que es unan solución fijante  si hay reacción antígeno anticuerpo y va jaber una coloración

--1 hora a una temperatura de 37°c , con una incubación a oscuras .

3) Solución STOP detiene la solución cambia de azul a amarillo

(+) o (-): PUNTO DE CUT OFF, el el punto que divide lo positivo de lo negativo

CRITERIOS DE Validación DEL ENSAYO

El ensayo se considera válido si se cumplen simultáneamente las siguientes condiciones:

1- El promedio de las absorbancias de los Controles Negativos debe ser menor o igual a 0,050

2- Para el cálculo eliminar cualquier Control Negativo con absorbancia mayor a 0,050

3- Si se ha eliminado algún Control Negativo, calcular nuevamente el promedio de los Controles Negativos. Un ensayo es válido si se aceptan al menos dos de los Controles Negativos.

4- El promedio de las absorbancias de los Controles Positivos debe ser mayor a 1,000

PARTE LIBRITO RESUMEN

POSITIVO:

probable infección por VIH. En estos cas recomienda repetir la prueba ELISA que, de ser pe deberá confirmarse mediante el test de Western Blot.

NEGATIVO:

No se encontraron anticuerpos anti-VIH en la muestra de sangre.

ELISA es el acrónico del término inglés: “Enzime Linked Inmunoabsorbent Assay” (ensayo de inmunoabsorción acoplado a enzima).

Es un test altamente específico, sensible (99,5%) y económico, usado en casos de "screening" o despístale de infección por VIH en grandes grupos de población y como prueba inicial de despistaje. Sin embargo, puede dar falsos positivos, por lo que debe confirmarse con el Test de Western Blot.

Se basa en determinaranticuerpos (Ac) anti-VIH en el suero. El suero problema se incuba con antígenos VIH que se hallan inmovilizados en cuentas o burbujas; los Ac no específicos se remueven mediante lavado, pero los Ac específicos quedan adheridos al sistema y su presencia es detectada por medios enzimáticos, mediante una anti-IgG humana unida a una enzima como la peroxidasa.
Si la reacción es positivaocurre un cambio de color evidenciable en el espectrofotómetro que será proporcional a la cantidad de Ac específico adherido.

Los test de ELISA y Western Blot

NO son pruebas para el SIDA. No indican si el paciente se va a enfermar de SIDA. Lo que estas pruebas indican es si el paciente ha desarrollado o no los anticuerpos específicos al VIH por infección con el virus.

El VIH infecta los linfocitos y otras células del cuerpo, causando linfopenia y disminución de la inmunidad celular.Consecuentemente, aparecen infecciones oportunistas y  procesos malignos dando lugar al estadio de Síndrome de Inmunodefioenaa Adquirida (SIDA).

Los test de ELISA y Western Blot pueden dar FALSOS NEGATIVOSdurante al período de ventana*
, que es el tiempo que transcurre entre la primoinfección y el desarrollo de Ac, que puede ser de 3-6 meses o más.