Tema 11. Histoquímica parte 2
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Histoquímica de las prots: Moléculas con el mayor nº de funciones: estructurales, metabólicas, reguladoras. Definen identidad del indiv. Base del ADN. Gran tamaño. 20 aa, 8 de ellos esenciales: Iso, Leu, Lys, Fenil, Treo, Metio, Trip y Valina. Prots. alto valor bio. Clasificación: Holoproteínas: Albúminas, globulinas, fibrilares. Producen aa cuando se hidrolizan. Heteroproteínas: fosfoproteínas, glucoproteínas, lipoproteínas, etc. Las holoproteínas se clasifican en: Prots. filamentosas: forma alargada. Resisten enzimas proteolíticos (colágeno, elastina, queratina). Prots. globulares: Forma esférica, solubles en H2O. Gran actividad bio. De las globulares las + imp: Albúminas: Fracción ppal prots plasmáticas. Regulan p. osmótica. Reserva ppal de prots. Transportadora. Ej: ovoalbúmina, seroalbúmina, etc. Globulinas: Elevado p. molecular. Incluye serglobulinas como alfa-globulina, beta-globulina y anticuerpos. Estudio de los aa: 4 grupos: radical amino, radical ácido, un hidrógeno y un grupo R. Dependiendo de la R pueden ser: Hidrófobos o apolares, Hidrófilos o polares y Neutros. Positivos: pH 7, carga positiva. Negativos: pH 7, carga negativa. Esenciales y no esenciales. Estructura primaria es la cadena de aa. Se unen entre sí liberando H2O. Rotación respecto al eje de la estructura primaria dando una hélice, o plegamiento en zig-zag es estructura secundaria. Disposición espacil la terciaria y asociación con otras estructuras cuaternaria. Fijación de prots: El estudio HQ suele realizarse en material fijado e incluido en parafina tener en cuenta modificaciones q produce dicho metodo.Indicada fijación formolica x reversibilidad en la reticularización e inactivación que produce cuando se trata con alcoholes. No indicado etanol ni metales pesados.Digestión enzimática: Uso proteasas dando polipéptidos q tienen más radicales quím. libres q prot original, y + teniendo en cuenta q la fijacion reticulariza y enmascara grupos quím impt. De gran utilidad xq incrementa intensidad de la reación d grupos especificos y desenmascara antígenos ocultos. Ppales proteasas: Pepsina, producida x glandulas fúndicas en estomago, pH 1.5 y 2. Tripsina, del pancreas, pH 7-8, mejor si se desnaturalizan previamente las prots. Pronasa, del Streptomyces griseus, similar a la tripsina. Métodos HQ xa colorear prots: Menos usados desde introducción metodos IHQ. Las técnias HQ xa prots se clasifican en: Reacciones generales: Colorear en general prots de un tejido. Tto del tejido con CuSO2 muy diluido en medio básico, dnd aparece color color rosa-malva x complejo cupro-alcalino. Reacciones de grupo: Pretenden caracterizar corto nº de grupos reactivos.Reacciones específicas: xa grupos concretos de aa: sulfhídrico, fenol, indol, etc. Composición exacta. Reacción de grupo: Ninhidrina-Schiff: Desaminación oxidativa d cadenas polipeptidicas x ninhidrina, x lo q grupos aminos se sustiyen x grupos carbonilos y éstos se determinan mediante reactivo de Schiff como en el PAS. Grupos aminos: rojo-púrpura.
Ác. nucleicos: pentosa (ribosa ó desoxirribosa) + base nitrogenada (A, G, C, T ó U) = Nucleósido. Nucleósido + fosfato = Nucleótido. Estructura ADN: 1ª: Secuencia nucleótidos. Representación x sus bases. Orden fundamental, 3'-5' ó 5'-3'. 2ª: Doble hélice antiparalela , esqueleto las cadenas de azúcar-fosfato , en el centro las bases formando puntes de H. A+T =2; G+C=3. Cadenas complementarias. Van en sentido opuestos. 3ª y 4ª: P ermiten el empaquetamiento del ADN : cromosomas. Eu varios cromos, en Pro , ADN empaquetado : pse udocromos. E structura ARN: Unicatenario, algunos virus con Bi. Pueden contener info, ade + , herramienta de conversión de la info del ADN. Funciones Ác. Nucleicos: ADN: conservación info y transmisión. ARN: en virus contener info y transmitirla, aunq función principal conversión de la info a prots.Extracción de los ác. nucleicos: M uchos metodos, seleccionar el + apropiado. Cualquiera, xa ser bueno, cumplir: rapidez, alto rendimiento y mín. manipulación posible. Técnicas HQ xa separar ADN d estructuras: R . DE FEULGEN: a) Hidrólisis ác:HCl rompe enlace del ADN entre pentosa - base, x lo q reaparece un grupo carbonilo a una distancia de 1 y 1.1 nm. b) Demotrar grupos carbonilos: Con reactivo de Shiff de form analoga al PAS. El ARN no tiene los carbonilos entre 1 y 1.1 nm x lo q no reacciona con el ác. sulfofucsídico. Problemas generales: Hidrólisis excesiva y envejecimiento del Schiff cuando aparece tonalidad rosada x liberación de fucsina, ya que éste es incoloro. ADN: Rojo-púrpura; Citoplasma: Verde.Téc. xa distinguir ARN d ADN: Verde metilo-pironina: Xa detectar cél. con gran capacidad síntesis, ricas en ARNr cm las cél. plasmáticas. Mecanismo radica en atracción electrostática entre verde metilo y pironina con los ác. nucleicos a pH 5. Fundamento sencillo, xo dificil preparar componentes, modo de operar e inconstancia resultados. Distintas variantes. La pironina no es específica xa ARN, x lo q se controla utilizando ribonucleasa en el corte control. Verde metilo suele estar contaminado con Violeta metilo y se separan decantándose en una solución acuosa d cloroformo ya q el Violeta metilo es soluble en él. Tener en cuenta: Cuidado con la amortiguación dl color rojo de pironina al deshidratar ya q el etanol disuleve pironina. pH en 5, Decantar verde metilo siempre. Nucleos: Verde (ADN); Citoplasmas: Rojo (ARN).Controles de la técn: Hidrólisis HCl xa destruir ác. nucleicos, descartar falsos + y Test de Brachet xa digestión ARN.Minerales y pigmentos: Sust. naturales coloreadas. Técn específicas xa identificarlos. Tipos de pigmentos: Artefactuales: Aparecen al aplicar incorrecta_ técn histológicas, ej: pigmento formólico. Exógenos: Procedentes del m. ambiente, penetran en org y dan coloración particular d ls tejidos. Patología subyacente sí o no, ej: humo tabaco, polvo de carbón. Pigmentos antracótico. Ingestión carotenos o agentes terapéuticos. Tatoos. Endógenos: Sust con color en tejidos. 2 tipos: Hemoglobinógenos (degradación normal o patológica hemoglobina): hemosiderina, hemofucsina, bilirrubina, etc. No hemoglobinógenos: melanina, lipofucsina, ceroide, cobre. Problema similitud del color pardo.
Ác. nucleicos: pentosa (ribosa ó desoxirribosa) + base nitrogenada (A, G, C, T ó U) = Nucleósido. Nucleósido + fosfato = Nucleótido. Estructura ADN: 1ª: Secuencia nucleótidos. Representación x sus bases. Orden fundamental, 3'-5' ó 5'-3'. 2ª: Doble hélice antiparalela , esqueleto las cadenas de azúcar-fosfato , en el centro las bases formando puntes de H. A+T =2; G+C=3. Cadenas complementarias. Van en sentido opuestos. 3ª y 4ª: P ermiten el empaquetamiento del ADN : cromosomas. Eu varios cromos, en Pro , ADN empaquetado : pse udocromos. E structura ARN: Unicatenario, algunos virus con Bi. Pueden contener info, ade + , herramienta de conversión de la info del ADN. Funciones Ác. Nucleicos: ADN: conservación info y transmisión. ARN: en virus contener info y transmitirla, aunq función principal conversión de la info a prots.Extracción de los ác. nucleicos: M uchos metodos, seleccionar el + apropiado. Cualquiera, xa ser bueno, cumplir: rapidez, alto rendimiento y mín. manipulación posible. Técnicas HQ xa separar ADN d estructuras: R . DE FEULGEN: a) Hidrólisis ác:HCl rompe enlace del ADN entre pentosa - base, x lo q reaparece un grupo carbonilo a una distancia de 1 y 1.1 nm. b) Demotrar grupos carbonilos: Con reactivo de Shiff de form analoga al PAS. El ARN no tiene los carbonilos entre 1 y 1.1 nm x lo q no reacciona con el ác. sulfofucsídico. Problemas generales: Hidrólisis excesiva y envejecimiento del Schiff cuando aparece tonalidad rosada x liberación de fucsina, ya que éste es incoloro. ADN: Rojo-púrpura; Citoplasma: Verde.Téc. xa distinguir ARN d ADN: Verde metilo-pironina: Xa detectar cél. con gran capacidad síntesis, ricas en ARNr cm las cél. plasmáticas. Mecanismo radica en atracción electrostática entre verde metilo y pironina con los ác. nucleicos a pH 5. Fundamento sencillo, xo dificil preparar componentes, modo de operar e inconstancia resultados. Distintas variantes. La pironina no es específica xa ARN, x lo q se controla utilizando ribonucleasa en el corte control. Verde metilo suele estar contaminado con Violeta metilo y se separan decantándose en una solución acuosa d cloroformo ya q el Violeta metilo es soluble en él. Tener en cuenta: Cuidado con la amortiguación dl color rojo de pironina al deshidratar ya q el etanol disuleve pironina. pH en 5, Decantar verde metilo siempre. Nucleos: Verde (ADN); Citoplasmas: Rojo (ARN).Controles de la técn: Hidrólisis HCl xa destruir ác. nucleicos, descartar falsos + y Test de Brachet xa digestión ARN.Minerales y pigmentos: Sust. naturales coloreadas. Técn específicas xa identificarlos. Tipos de pigmentos: Artefactuales: Aparecen al aplicar incorrecta_ técn histológicas, ej: pigmento formólico. Exógenos: Procedentes del m. ambiente, penetran en org y dan coloración particular d ls tejidos. Patología subyacente sí o no, ej: humo tabaco, polvo de carbón. Pigmentos antracótico. Ingestión carotenos o agentes terapéuticos. Tatoos. Endógenos: Sust con color en tejidos. 2 tipos: Hemoglobinógenos (degradación normal o patológica hemoglobina): hemosiderina, hemofucsina, bilirrubina, etc. No hemoglobinógenos: melanina, lipofucsina, ceroide, cobre. Problema similitud del color pardo.