Tècniques Immunològiques de Laboratori: Guia i Resum
Tècniques Primàries i Marcatge
Immunofluorescència (IF): FITC, rodamina; indirecta (porta, control), sense reaccions creuades per anticossos monoclonals.
Citometria de flux: fluoròcroms, CD4.
Radioimmunoanàlisi (RIA): similar a l'ELISA, radioisòtops, baixa eficiència, picograms, protocol, H3, C14.
ELISA: anticossos recoberts, incubació, rentat, solució de blocatge, mostres, anticòs-HRP, substrat TMB, stop.
Immunoelectroforesi: vacunes, qualitat.
Immunohistoquímica: tropisme (directa): fixa, tinta, anticòs, substrat; (indirecta): incubació antigen i sèrum amb anticòs, més anticossos marcats amb enzim.
IPMA: cèl·lules infectades, sèrum-IgG, anti-IgG peroxidasa, microscopi invertit.
Tècniques Secundàries i Precipitació
Precipitació: antigen soluble, anticòs (Ig), immunogèl.
Immunodifusió radial: quantitativa.
Doble difusió: si les mostres tenen antigens similars, antígens en pous pròxims a l'anticòs, difícil.
Immunoelectroforesi bidimensional: útil en mescles; l'electroforesi separa la barra, tall, línia d'anticossos, electroforesi a 90°, arc = concentració, semiquantitatiu.
Aglutinació
Agutinació: antigen inconstant, anticòs aglutinant.
Rosa de Bengala: busca brucel·losi, antigen inactivat rosa + sèrum/anticòs = aglutinació.
Aglutinació directa semiquantitativa: efecte prozona.
Aglutinació passiva / Hemoaglutinació: precipitació cap a aglutinació (més sensible).
Inhibició de l'hemoaglutinació vírica: concentració d'anticossos, grip, Newcastle, concavanalina.
Sistema del Complement i Sèrum
Sistema del complement: sèrum a titular (anticòs + antigen + complement + incubació + hemolisines + incubació).
Sèroneutralització: efecte citopàtic, comprovar, no virus, resultats, no sèrum.
Proves Cel·lulars i Proliferació
Prova de la tuberculina: +PPD (microbacteris) a la pell, resposta Th1, fa citocines, hipersensibilitat.
Proliferació: control negatiu (medis), control positiu (mitògens policlonals que estimulen).
Radioactivitat: PBMC + estímul + incubació + nucleòtids en H3 + incubació + destrucció cel·lular + filtratge de nuclis (CPM), sensible, contaminació.
Colorimetria: formazà, Alamar Blue.
FACS: marcatge contra CD25, CD28 de cèl·lules T activades, posant PKH26 fluorescent, captat per la membrana; la divisió equival a menys fluorescència.
Elispot: PBMC + estímul + incubació + anticòs de citocines + incubació, rentat + anticòs marcat + substrat + taques (spots).
Citometria FACS: perfil de citocines, intracel·lular, estímul + brefeldina A, fixar cèl·lules, anticòs premacat.
Citotoxicitat: inactiva replicació cèl·lules T, marcatge amb Cr51, al lisar deixa anar la radioactivitat; alternativa FACS amb cèl·lules tapissades de DiO verd.
Cèl·lules B secretores d'anticossos: RIA, ELISA, tècnica de placa hemolítica.
Fagocitosi
Adherència: integrines, donen adherència i s'activen en cèl·lules actives; FACS, immunofluorescència.
Separació de PMN: extracció de polimorfonuclears en Ficoll, el pèlet el passem per boles de vidre.
Quimiotaxi: observació, microfiltre en líquid quimiotàctic, calç blanc, migració en agarosa.
Ingestió: radioactivitat, color (oli Sudan III per ingestió), boles de vidre.
Mort: microorganismes viables, reducció de NBT (cristalls de formazà), quimioluminescència (cal luminol = més llum).