Tinción de Gram, Ziehl-Neelsen y estructura bacteriana

Tinción de Gram

Permite distinguir las características de la pared celular entre las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas.

• Se utiliza el colorante cristal violeta o Lugol. En la tinción inicial, todas las bacterias del medio se tiñen, viéndose de color violeta (azulado).
• Se usa un decolorante como el alcohol o la acetona para eliminar el cristal violeta o Lugol de las Gram-negativas.
• Las Gram-positivas siguen estando de color violeta, pero las Gram-negativas pierden el color (quedan transparentes).
• Para visualizar las Gram-negativas, se usa un colorante de contraste como la safranina o fucsina. De esta forma, las Gram-positivas se verán violetas (azuladas) y las Gram-negativas se verán rojas.

Tinción de Ziehl-Neelsen (Ácido-Alcohol Resistencia)

• Se utiliza para distinguir las bacterias ácido-alcohol resistentes (principalmente Micobacterias y bacterias del género Nocardia) de las que no lo son.
• La principal diferencia con la tinción de Gram es que la decoloración es más agresiva.
• Las bacterias ácido-alcohol resistentes se verán rojas, y las no ácido-alcohol resistentes se verán azules (tras la tinción de contraste).

Tinciones Específicas

1. Tinción de Schaeffer-Fulton

• Se utiliza para visualizar endosporas.
• Las endosporas se tiñen de verde de malaquita.
• La tinción se fuerza aplicando calor.
• La decoloración se realiza con agua.
• El colorante de contraste es safranina (rosa).

2. Tinción de Leifson

• Se usa para teñir flagelos.
• Utiliza una mezcla de rosanilina (que los colorea) y ácido tánico (que los engruesa para hacerlos visibles).

3. Tinción Negativa

• Es una técnica empleada con frecuencia en microbiología.
• Se utiliza para observar bacterias capsuladas.
• Se realiza añadiendo tinta china o nigrosina a una muestra en fresco.
• Se observan zonas blancas y brillantes (las cápsulas) sobre un fondo negro. Todo se tiñe excepto la cápsula.

Tinciones Fluorescentes

Se emplean en el diagnóstico indirecto para detectar anticuerpos y también se usan en el diagnóstico directo para identificar microorganismos específicos mediante anticuerpos marcados con fluorocromos.

Otras Tinciones

• Tinción de Giemsa: Útil para visualizar células eucariotas (como parásitos sanguíneos) y algunas bacterias intracelulares.
• Tinción argéntica (sales de plata): Se utiliza para observar espiroquetas, que son difíciles de teñir con métodos convencionales.

Estructura General Bacteriana

Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas poseen envolturas celulares que, desde el interior hacia el exterior, son: la membrana citoplasmática, la pared celular y, en algunos casos, el glucocálix (cápsula o capa mucosa).

En el interior de la célula se localiza el citoplasma, que contiene los ribosomas, el cromosoma bacteriano (ADN) y otros elementos como plásmidos o inclusiones.

Algunas bacterias poseen estructuras externas como flagelos (para la movilidad), fimbrias y pili (para la adherencia y transferencia genética, respectivamente).

Las espiroquetas poseen órganos de locomoción particulares denominados filamentos axiales o endoflagelos.

Elementos obligados de una célula bacteriana: Membrana citoplasmática, pared celular (en la mayoría), citoplasma, ribosomas y material genético (ADN).

Membrana Plasmática o Membrana Citoplasmática

Es una estructura vital situada debajo de la pared celular. En las bacterias Gram-negativas, está separada de la membrana externa por el espacio periplásmico. En las Gram-positivas, este espacio es casi inexistente.

• Está formada por una bicapa lipídica (aproximadamente 40%) y proteínas (aproximadamente 60%).

Componentes:

• Lípidos: Mayormente fosfolípidos. Algunas bacterias contienen también glucolípidos. A diferencia de las eucariotas, generalmente carecen de esteroles (excepto micoplasmas).
• Proteínas: Hay dos tipos principales:
  • A) Integrales o intrínsecas: Embebidas en la bicapa lipídica, algunas la atraviesan completamente (transmembrana). Participan en el transporte de sustancias, transducción de señales, etc.
  • B) Periféricas o extrínsecas: Unidas más débilmente a las superficies internas o externas de la membrana.

Funciones Principales:

1. Barrera semipermeable: Mantiene el medio interno y regula el paso selectivo de solutos.
2. Participa en procesos vitales:
   • a. Bioenergéticos: Sede de la cadena de transporte de electrones y la fosforilación oxidativa en bacterias aerobias y anaerobias facultativas, generando ATP a partir de ADP.
   • b. Biosintéticos: Interviene en la síntesis de componentes de la pared celular, lípidos y otros constituyentes celulares.
   • c. Biodegradativos: Secreta exoenzimas hidrolíticas que degradan macromoléculas en el exterior.
3. Anclaje: Lugar de anclaje para flagelos y pili.
4. Quimiotaxis: Contiene receptores implicados en la respuesta a estímulos químicos.
5. Mesosomas: Invaginaciones de la membrana (más prominentes en Gram-positivas, aunque su existencia *in vivo* es debatida) que se creía participaban en la división celular y la segregación del ADN.

Características de la Pared de Bacterias Gram-positivas

1. Presentan una gruesa capa de peptidoglucano o mureína.
2. Contienen ácidos teicoicos y lipoteicoicos, que son polímeros importantes para la estructura y antigenicidad de la pared.
3. Pueden tener asociados polisacáridos y proteínas.