Técnicas Modernas para la Identificación de Microorganismos Ambientales

Métodos de muestreo de agentes biológicos

Podemos identificar y cuantificar los microorganismos ambientales a partir de fragmentos celulares (proteínas, enzimas, ADN...) o algún metabolito que producen, como endotoxinas, glúcidos o componentes de la pared celular, utilizando distintas técnicas que nos permiten identificar al microorganismo o cuantificar su cantidad.

a) Métodos que detectan elementos celulares

Todas estas técnicas identifican alguna parte o fragmento del microorganismo y, a partir de su identificación y cuantificación, se puede calcular la concentración.

Método de test Limulus

Se basa en una propiedad que tiene el suero de la sangre de estos cangrejos (Limulus polyphemus), el cual reacciona con las endotoxinas bacterianas perdiendo la claridad del suero. Como existe una curva de extinción entre la concentración de endotoxinas y la turbidez del suero, se puede conocer la carga bacteriana en el líquido a analizar.

Método ELISA

Se basa en la reacción antígeno-anticuerpo. Los elementos celulares se unen para formar un complejo antígeno-anticuerpo; esto ocurre de forma específica, como una llave con su cerradura. Es un método muy preciso y exacto. Además, en un segundo ciclo de anticuerpo-antígeno-anticuerpo, permite identificar y cuantificar el complejo resultante.

b) Métodos de identificación de metabolitos o metabolismo

Sirven para identificar o cuantificar a los microorganismos a partir de la detección de algún metabolito que fabrique el microorganismo (ya sea que lo libere al medio o quede en su interior) o a partir del propio metabolismo del microorganismo:

1º Identificación de metabolitos

Identifican algún metabolito producido por el microorganismo y se relacionan con su concentración.

• Análisis de ATP: Consiste en identificar y cuantificar la concentración de ATP presente en el medio estudiado. Como esta concentración está relacionada con la cantidad de microorganismos vivos, se puede conocer la población de estos.
• A través de metabolitos secundarios: Se basa en el análisis y detección de algún metabolito intermedio específico de un microorganismo o un grupo de microorganismos, lo que permite cuantificar e identificar el tipo de microorganismo.

2º Identificación a través del metabolismo

Es una batería de tests que identifica el tipo de metabolismo del microorganismo. Estos tests suelen constar de entre 8 y 12 indicadores metabólicos.