Técnicas de Identificación en Biología Forense: Sangre, Semen y Ensayos Inmunológicos

Enviado por Programa Chuletas y clasificado en Química

Escrito el en español con un tamaño de 5,19 KB

Técnicas de Identificación en Biología Forense

Sangre

Orientación

Se basan en la acción catalítica de la hemoglobina que aprovecha la presencia de peroxidasas que descomponen el agua oxigenada en presencia de un sustrato:

  • Adler: solución acética de bencidina + agua oxigenada = azul.
  • Kastle Meyer: fenolftaleína + KOH = coloración roja + zinc = se calienta hasta que se pone incolora. Sobre un hisopo, se coloca la muestra + reactivo + agua oxigenada = rojo por oxidación de fenolftaleína.

Certeza

  • Teinchman: ácido acético glaciar + muestra = prismas castaños de cloruro de hemina.
  • Takayama: piridina + NaOH + glucosa + muestra = placas rojo anaranjadas.

Semen

  • Florence: lugol + muestra = agujas rojas para colina (yoduro de colina).
  • Barberio: ácido pícrico + muestra = picrato de espermina (agujas amarillas refractantes).

Electroforesis

Primero se separa la espermina de los aminoácidos del semen. Se deja secar el papel y se gira 90º para hacer cromatografía. Se revela con nihidrina calentando en estufa a 80ºC. Falencia: no estudia simultáneamente la colina. Solución: corrida electroforética en papel (fase móvil: piridina, ácido acético y agua) en paralelo con testigos de espermina y colina. Se calienta a 80ºC para eliminar la piridina que interfiere con el reactivo de Dragendorff. En una corrida de una hora y 50 minutos a 350 volts, la espermina migra 14,5 cm y la colina 17 cm. Después se gira el papel y se hace la cromatografía con fase móvil ClH, butanol y agua. La colina se revela con Dragendorff (rosa) y la espermina con reactivo yodoplatínico (púrpura).

Electroforesis para fosfatasa ácida: se colocan las muestras en soporte de almidón en placa de acrilamida y se hace electroforesis. Luego se coloca un papel encima transfiriendo la fosfatasa ácida al mismo. Se revela con fosfato de umberifenol que es hidrolizado por la fosfatasa ácida quedando metil umberiferona, que es fluorescente. La fosfatasa ácida prostática (FAP) es mucho más fluorescente que las demás fosfatasas ácidas. La fosfatasa ácida sanguínea no se detecta.

Inmunoensayos

Rápidos, económicos y seguros.

HAI (Inhibición de la Hemaglutinación)

Tenemos:

  1. Suero anti HGC.
  2. Orina de la paciente.
  3. Hematíes recubiertos con HGC.

Si 1 y 2 se unen, 3 no se puede unir, se inhibe: hay embarazo. Si 1 y 2 no se unen, se unen 1 y 3: hay aglutinación y no hay embarazo.

LAI (Inhibición de la Aglutinación del Látex)

Igual que HAI pero en vez de hematíes, usan partículas de látex recubiertas con HGC.

Test directo

Se recubren los hematíes o las partículas de látex con anticuerpos anti HGC. Si la orina tiene HGC se produce aglutinación: embarazo.

Radioinmunoensayo

Es un ensayo por competición. Tenemos:

  1. Anticuerpo.
  2. Antígeno (orina del paciente).
  3. Antígeno * marcado con un isótopo radioactivo.

Confrontamos 1 con 2, si se produce el complejo AgAc, cuando agreguemos Ag* no va a pasar nada porque el anticuerpo ya está ocupado. A más AgAc, menos Ag*Ac.

Enzimoinmunoensayo (ELISA)

Se usan pocillos plásticos tratados que tienen gran afinidad por proteínas. También se usan anticuerpos y antígenos marcados con una enzima. Hay 4 tipos:

  • Directo: se pone la orina (tiene antígeno) en el pocillo. Después se agregan los anticuerpos marcados con enzima. Si la orina tiene HGC se forma el complejo AgAc. Después se lee por espectrofotometría la densidad óptica.
  • Indirecto: se pone la orina en el pocillo (antígeno). Después se pone anticuerpo anti-HGC NO marcado. Después se coloca un anticuerpo anti-anticuerpo anti-HGC marcado. De estos últimos se pueden unir 2 o más al primer anticuerpo que pusimos. Es el sistema más popular.
  • Competitivo: se pone el pocillo + anticuerpo + antígeno (orina). Se deja incubar para que se forme o no el complejo AgAc. Después se agrega un Ag*. Entonces: si se formó antes el AgAc, con Ag* no va a pasar nada (embarazo). Si no se formó AgAc, ahora se va a formar Ag*Ac, queda un complejo marcado, el cual indica que NO hay embarazo.
  • Sándwich: se pone el pocillo con anticuerpo + muestra con antígeno (orina c/HGC) + 2do anticuerpo anti-antígeno marcado. Esto permite una gran amplificación.

Enfermedades Venéreas

  • Sífilis: Treponema pallidum (bacteria bacilo: se mueve como un resorte).
  • Gonorrea: Diplococo Neisseria gonorrhoeae.
  • Tricomoniasis: Trichomona vaginalis. Única fase: trofozoítos.

FAP: fosfatasa ácida prostática. La diferencia con las otras fosfatasas ácidas es que el ácido tartárico la inhibe.

Entradas relacionadas: