Técnicas Espectrométricas no Espectroscópicas: Espectrometría de Masas

Tres procesos:

• IONIZACIÓN: de las muestras
• SEPARACIÓN: de los iones resultantes de acuerdo con su relación masa/carga
• DETECCIÓN: de las abundancias de los iones

Fotometría de Reflectancia. Química Seca

Existen varios tipos:

• COLORIMÉTRICA: la medida se produce por cambio de color cuando termina la reacción con el reactivo dentro del soporte.
• POTENCIOMÉTRICA: se mide la diferencia de potencial con un ion selectivo.
• ENZIMÁTICA: la lectura se hace en varios puntos durante una reacción catalizada por un enzima. De este modo podemos medir la actividad enzimática.

Aplicaciones

La refractometría se utiliza para compuestos en sangre, plasma, orina.

Polarimetría

Fundamento

Se basa en la desviación del plano de luz polarizada por parte de las moléculas activas ópticamente.

Aplicaciones

Las moléculas biológicas ópticamente activas son los glúcidos, los aminoácidos y las proteínas. Se determina no solo de forma cualitativa; si se realizan las rectas de calibrado se puede determinar cuantitativamente su concentración.

Cromatografía de Exclusión por Tamaño

Se utilizan microesferas porosas formadas por un entramado tridimensional de fibras de polímeros naturales como la agarosa. Los espacios entre estas fibras formarán los poros. Las moléculas de menor tamaño entran por los poros de la microesferas y son retenidas en el interior de la columna. Las de mayor tamaño no pueden entrar en las esferas y saldrán más rápido de la columna. Este principio de separación se llama exclusión molecular, hace que las moléculas eluyan de forma inversamente proporcional a su masa molecular.

Cromatografía de Intercambio Iónico

Las moléculas se separan por su carga. La matriz que se utiliza es una molécula catiónica o aniónica, que atrae a las moléculas con carga opuesta, en mayor medida cuanto mayor sea su carga. Para conseguir la elución progresiva de las moléculas según su carga se suele aumentar la fuerza iónica o el pH de la fase móvil.

Cromatografía de Afinidad

Las proteínas se separan en base a su afinidad de unión específica a los ligandos unidos a la matriz de la columna. Una columna de afinidad puede retener específicamente a una o varias moléculas, lo que implica el uso de anticuerpos unidos a la matriz.