Técnicas de Detección y Clasificación de Virus

Clasificación de Baltimore

El virus se organiza en siete grupos fundamentales según la base química del genoma (material genético que contenga) y el mecanismo de reproducción del ARNm. 7 grupos. 

Detección de Virus 

Como sólo se pueden replicar dentro de las células, no podemos utilizar los mismos cultivos que usamos con las bacterias.

Dado que no forman parte de ninguna colonia, se deberán utilizar otras técnicas para detectar la presencia de las colonias.

Utilizar sistemas celulares.

Sólo se puede visualizar mediante microscopios electrónicos.

Muestras 

(es muy importante coger la muestra cuando aparecen los síntomas, porque cuanto más pasa menos cantidad de virus, y la probabilidad de éxito es menor)

La correcta toma y procesamiento de una muestra clínica es el primer paso para obtener un diagnóstico de laboratorio de una enfermedad vírica.

Las mejores muestras son las que se obtienen en las primeras fases de la enfermedad, preferiblemente en las primeras 72 horas de la misma, con altas concentraciones virales. Transcurridos 7 días desde la infección, no merece la pena realizar crecimientos virales.

Técnicas para la Detección de Virus

1. Análisis Directo de la Muestra:

Técnicas de diagnóstico rápido que se basan en detectar en esa muestra la presencia de un antígeno o del ácido nucleicos del virus, mediante en el que se detecta si ha habido una respuesta inmunológica frente a ese virus. (técnicas que no necesitan incubación más o menos jeje)

2. Técnicas de Cultivo (técnicas para detectar/identificar la presencia de virus a través de cultivos) 

Los cultivos celulares se preparan a partir de un tejido u órgano. Existen tres tipos par obtener las células, que son lo que necesitan los virus para reproducirse:

• Cultivo primario. Cultivo inicial a partir de la muestra primaria, es decir del tejido directamente. Células que se extraen de órganos que tienen un tiempo limitado de mantenimiento.
• Línea celular primaria. En el cultivo está la reproducción celular. Generar una línea de células a partir del crecimiento primario (cultivo puro). Cuando las células agotan la superficie del cultivo se pasan a otra superficie para que sigan reproduciéndose. (subcultivo de un cultivo primario)
• Línea celular continua. La proliferación celular no tiene límites. Las células tumorales son inmortales. 

La muestra se inocula en el tipo celular elegido y se incuba durante 14 días. El cultivo se observa en 24, 48 y 72 horas y luego dos veces por semana. Se observa el efecto de los virus en las células. (No se ven los virus si no las alteraciones de las células.)

3. Técnicas Inmunológicas: Pueden ser directas o indirectas.

Son técnicas que se basan en reacciones antígeno-anticuerpo para saber si el virus está o ha estado.

Indirecta

No veo el resultado a simple vista, para ver la reacción tengo que marcar alguno de los dos elementos (normalmente el comercializado). Se diferencian teniendo en cuenta el marcador que se utiliza para detectar la presencia de estos anticuerpos o antígenos.

• Inmunofluorescencia: fluorocromos
• Radioinmunoensayos: isótopos radioactivos
• Enzimoinmunoensayos: enzimas

Directa

El resultado (la reacción) lo veo a simple vista con una forma de cuarteado, no hay que utilizar ningún marcador

• Pruebas de aglutinación: cuando el antígeno está sobre una superficie sólida 

Directa: cuando ves la bacteria 

Indirecta:  no tratas el m.o directamente sino que se busca alguna proteína que te indica la presencia de ese m.o.

4. Técnicas de Biología Molecular ;- PCR. , -- Sondas Genéticas.