Técnica de levaditi

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La lectura se debe tomar pasado el tiempo señalado para evitar deformación de las fases de parásitos. La materia fecal se puede utilizar con soluciones conservadoras o sin ellas.

Otra técnica muy utilizada en veterinaria es la flotación sim-ple en solución saturada de sacarosa (azúcar de mesa), la cual se realiza de manera semejante a la descrita antes. Algunos parasitólogos recomiendan una densidad de la solución de sacarosa de 1.200°Bé. Esta técnica, como la anterior, también puede provocar la deformación de las formas parasitarias, por lo que la lectura se debe hacer 15 a 20 min después de hacer el homogeneizado.
También es posible utilizar muestras con diversos conservadores.

CPS DE CONCENTRACIÓN

•Por centrifugación/flotación

Se conoce como técnica de Faust, ya que fue él quien la diseñó en 1938. Es una de las más populares; se utiliza prácticamente en todos los laboratorios del sector salud y privados. Se utiliza una so-lucíón de sulfato de cinc con densidad de 1.180°Bé;
Si se carece de densímetro ya hay técnicas mediante las cuales se sabe la cantidad de sal por utilizar para tener una densidad aproximada en 350 g, aunque siempre es recomendable ajustar la densidad.

La técnica en sí consiste en homogeneizar con agua de la llave una pequeña porción de materia fecal; luego se centrifuga y se lava una o dos veces, entre las cuales se decanta el líquido sobrenadante; el último botón se homogeneiza con la solución de sulfato, se vuelve a centrifugar y se toma el sobrenadante con un asa de alambre. Luego se homogeneiza con lugol, se cubre y se observa. Se pueden trabajar las muestras de inmediato o utilizar un conservador (formalina al 5 al 10%).

•Por sedimentación-centrifugación  o de Ritchie

Se conoce en los laboratorios de diagnóstico como técnica del formol éter.
Se utiliza una solución de formalina al 10%, la cual sirve para fijar las formas parasitarias y el éter para liberarlas. Se recomienda la utilización de tubos de centrífuga cónicos, lo que hace que la técnica no sea muy popular por la carencia de los mismos. No obstante, es posible utilizar los tubos de 13 ×100 mm con resultados satisfactorios. La muestra se homogeneiza con solución salina isotónica y se centrifuga, se lava y se obtiene el sedimento, al que se agrega la solución de formalina y enseguida el éter. Luego se agita y se vuelve a centrifugar. En el sedimento final se encuentran las formas parasitarias diagnósticas.

CPS DE SEDIMENTACIÓN SIMPLE EN COPAS

Es una técnica indicada para los casos en que se requiere diagnosticar fasciolosis, aunque se pueden encontrar otros tipos de huevos de helmintos e inclusive quistes, y aunque sean más prácticas las técnicas ya descritas. Se utiliza una solución de detergente y otra de verde de malaquita.

El detergente libera los huevos de Fasciola hepática y el colorante tiñela materia fecal y artefactos, con excepción de los huevos que permanecen con su color natural.

Se puede observar directamente el sedimento en una caja de Petri mediante una lupa, o bien hacer varias preparaciones y llevarlas al microscopio en el cual se utiliza el objetivo de menor aumento (4×). Recuérdese que los huevosmiden 120 a 150 µm.

MÉTODOS CUANTITATIVOS

Enseguida se describen algunos métodos que se utilizan para relacionar la eliminación de huevos de un helminto con la masividad de la parasitosis, la cual se entiende como aquélla en la que los signos y síntomas son muy específicos de la misma. Cuando se describíó el CPS directo en fresco, se trató también la variante cuantitativa. Debido a que sólo se evalúa masividad en las helmintiasis, las técnicas cuantitativas son las mejores para las mismas.

Examen CPS cuantitativo por dilución

Esta técnica se conoce en todo el mundo como técnica de Stoll.
En ella se emplea una solución de hidróxido de sodio 0.1 N (décimo normal). Originalmente se ideó y diseñó para cuantificar huevos de Ancylostoma duodenaley Necator americanus;
Después se popularizó, y desde 1923, en que se publicó la técnica original, se sigue utilizando hasta la actualidad. Este método requiere probetas y pipetas calibradas, pues se debe hacer una suspensión de materia fecal-solución de hidróxido de sodio 1:15;
De esta dilución se obtiene un factor por el que se multiplica el número de huevos encontrados para reportarlos como h/ml/h (huevos por mililitro de heces).

Método CPS cuantitativo del frotis grueso o de Kato-Miura

En 1954,Kato y Miuradiseñaron este método. En 1966, Komiya y Kobayashi lo valoraron, y en 1968,Martín y Beaver lo revaluaron.
Desde entonces se sigue utilizando en ciertos laboratorios de diagnóstico y algunos institucionales. En cualquiera de las modificaciones y en la técnica original se utilizan cubreobjetos de celofán humedecible previamente puestos a reposar en una solución de verde de malaquita y glicerina, con la que se impregnan.
La glicerina sirve para aclarar los huevos de los parásitos y el verde de malaquita para contrastarlos.

En la técnica original y la valorada se utiliza la muestra de materia fecal sin ningún procedimiento adicional, pero en la modificación propuesta por Martín y Beaver se recomienda el uso de una malla de alambre para mosquitero para pasar la muestra y obtenerla más limpia. Los cubreobjetos que se utilizan en todas ellas se tratan de la misma manera. Para hacer el informe se plantea una regla de tres simple y se utilizan huevos por gramo de heces (h/g/h).

Como la cantidad de materia fecal requerida para el frotis grueso varía de 30 a 50 mg, es necesario hacer varias calibraciones en el laboratorio para estandarizar la cantidad utilizada y así obtener el factor por el que se multiplicará la lectura en lo sucesivo.

Método CPS cuantitativo del frotis grueso o Kato-Katz

Este método tiene el mismo fundamento que el anterior, sólo que además de la malla de alambre se utiliza un cartón grueso (3 mm de grosor)
Con un hoyo de un diámetro de 6 mm, por donde se hace pasar la muestra previamente tamizada en la malla de alambre. De esta manera se forma un pequeño cilindro al que se coloca el cubreobjetos de celofán y los valores se dan también de la misma manera que en el método anterior, aunque aquí hay que estandarizar la cantidad de muestra que contiene el cilindro.



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