Pruebas Bioquímicas de Identificación Bacteriana

Pruebas bioquímicas de identificación bact.

La identificación de microorganismos se basa en el estudio de un conjunto de características de los mismos. Entre ellos sobresale por su especificidad y metabolismo. Los microorganismos tienen su propio metabolismo. Y las reacciones en las que se lleva a cabo el metabolismo vienen regidas por las enzimas, los cuales son característicos para cada germen y es una útil herramienta para la identificación y clasificación bacteriana.

1. Identificación se basa en el estudio de una serie de características, que se comparan con los caracteres medios de un grupo de microorganismos conocido.
2. Se tiene que realizar sobre un cultivo puro, joven y en su fase exponencial de crecimiento.

La identificación tiene que empezar por los aspectos morfológicos: forma, Gram, movilidad, etc., y luego el resto de pruebas bioquímicas. Las pruebas pueden ser:

• Sistemas monoprueba convencionales: permiten realizar una prueba en medio líquido en tubo de ensayo, en medio sólido en tubo de ensayo o en placa.
• Sistemas monoprueba no convencionales: permiten realizar una prueba sobre un portaobjetos o sobre bastoncitos reactivos o sobre tiras de papel reactivo.
• Sistemas multiprueba, que permiten realizar varias pruebas bioquímicas a la vez.

CATALASA.

Se basa en poner en contacto el microorganismo, con peróxido de hidrógeno, y observar la presencia de la enzima por aparición de gas (O2). Se diferencian Streptococcus (-) de Micrococcus (-) y Staphylococcus (+), y Bacillus (+) de Clostridium (-).

OXIDASA.

La identificación de esta enzima se basa en la capacidad del colorante tetrametil-para-fenilendiamino de oxidarse al ceder electrones al citocromo c. El reactivo empleado es el cloruro de tetrametil-p-fenilendiamina en tiras reactivas. Oxidasa +: Color violeta intenso, casi negro. Oxidasa -: Permanece del mismo color.

OF BASAL.

Se le agrega un hidrato de carbono en nuestro caso la glucosa. Medio semisólido para la identificación de la movilidad. Micoorg. Oxidativos del hidrato de carbono: Reacción ácida tubo abierto. Poco o nulo desarrollo y ausencia de ácido tubo cerrado. Micoorg. Fermentativos del hidrato de carbono: Reacción ácida en ambos tubos. Microorg. no utilizan el hidrato: No se producen cambios.

OF BASAL Semisólido.

Crecimiento alrededor de la línea de siembra: Microorg. móvil. Crecimiento en línea marcada: Microorg. inmóvil.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS.

P TRIPLE AZUCAR HIERRO. El medio es agar hierro de Kligler en tubo de pico de flauta, se trata de un medio diferencial muy útil, ya que demuestra varias características enzimáticas de la bacteria, se compone de dos azúcares en distinta proporción (glucosa 0,1% y lactosa 1%) tiosulfato sódico, citrato férrico y rojo fenol como indicador de pH.

Técnica.

En el tubo con KIA en pico de flauta y con el hilo de siembra, se siembra en picadura y se saca sembrando en estrías en la superficie inclinada.

Lectura.

Después de 16 – 24 horas de incubación a 37o C. Los resultados se interpretan:

1. Viraje a amarillo en la parte inferior, Glu (+)
2. Viraje a amarillo en todo el tubo, Lac (+)
3. Burbujas o ruptura del medio, Gases (+)
4. Precipitado negro, H2S (+).
5. Si no fermenta los azúcares. bacteria aeróbica estricta medio rojo.

P IMVIC

INDOL. Esta prueba se emplea para detectar la presencia del enzima triptofanasa en las bacterias. Reactivo Kovacs. Medio AP Tamponada. Técnica. Se siembra la bacteria en un tubo con el medio de agua de peptona tamponada, empleando un asa de siembra y se incuba a 37o C durante 48 horas. Lectura. Después de Incubación, se añade el reactivo de Kovacs se agita y se espera a que se separen las dos fases (se produce en pocos segundos). Prueba positiva (presencia de enzima triptofanasa). Aparición de anillo rojo en la parte superior del tubo.

P ROJO-METILO.

Detección de la ruta fermentativa ácido-mixta. Medio Caldo Rojo metilo–Voges-Proskauer.(RM-VP) Reactivo Indicador Rojo de metilo al 0,5% Técnica En el caldo RM-VP se siembra la bacteria (con asa de siembra) y se incuba 48 horas a 37°C. Lectura. Después Incubación, añadir varias gotas del reactivo. Prueba positiva (fermentación ácido-mixta). Viraje a rojo del medio RM (+) Prueba negativa. Presencia de coloración amarilla RM (-).

P VOGES PROSKAUER.

Detección de la ruta fermentativa butilen-glicólica. Medio Caldo RM- VP Reactivos. KOH(40%) y Alfa-naftol Técnica En el caldo RM-VP se siembra la bacteria (con asa de siembra) y se incuba 48 horas 37°C. Lectura. Después de la incubación, se le añaden 0,5 ml de cada reactivo y se agita y se mantiene inclinado para favorecer la reacción. Prueba positiva. Coloración rosa del medio: VP (+) Prueba negativa. Ausencia de coloración rosa del medio VP (-). P CITRATOS. Indica la capacidad de las bacterias para metabolizar el citrato, empleándolo así como única fuente de carbono. Medio Agar Citrato de Simmons en tubo inclinado Técnica La superficie del tubo inclinado se siembra con el asa y se lleva a incubar durante 48 horas a 37o C. Lectura. 1 Prueba positiva. Coloración azul del medio(se ha producido el viraje del indicador): Citratos (+) 2. Prueba negativa. El medio sigue mostrando el color verde: Citratos (-).