Prueba de satelitismo con s. Aureus
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El amoniaco reacciona en la solución para dar carbonato de amonio, producíéndose unaalcalinización y un aumento del pH del medio que lleva como indicador el rojo neutro.
MATERIALES
-Cepa patrón ureasa positiva y negativa ( E. Coli, Proteus )
-Medio Agar urea según Christensen
PROCEDIMIENTO
1.Por medio de la siembra por estría, sembrar la cepa positiva y negativa. No inocular en el fondo
2.Incubar durante 18- 24 horas a 37°C
Interpretación
•Prueba positiva:
se observa de color rosado en la superficie o en todo el medio.
•Prueba negativa
El medio permanece del color original
V.PRUEBA DE LA CATALASA
La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias y facultativas anaerobias.
El peróxido de hidrógeno (H2O2) es uno de los productos finales del metabolismo oxidativo de los carbohidratos y sí se acumula es letal para el microorganismo.
La catalasa convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno de acuerdo a la siguiente reacción:
2 H2O2 --------> 2 H2O + O2
La prueba es de vital importancia en la diferenciación de los estreptococos (catalasa negativa) de los estafilococos (catalasa positiva).
MATERIALES
-Cepas Control: S. Aureus, Streptococcus ó Enterococcus
-Solución de Peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3%
-Medio de cultivo: cualquier medio sólido, no inhibitorio, y sin sangre ya que los eritrocitos poseen actividad de catalasa, por lo que su presencia puede dar resultados falsos positivos.
PRUEBA EN LÁMINA
a)Con el asa bacteriológica en punta o un aplicador estéril, picar el centro de una colonia bien aislada y transferir él inoculo a un portaobjetos limpio.
B)Añadir 1 a 2 gotas de H2O2 al 3%
C)Observar si se forman burbujas o no inmediatamente después que se añade el reactivo
D)Descartar la lámina en un recipiente con desinfectante
PRECAUCIONES
1.El orden de la prueba en lámina no debe invertirse cuando se use asa de platino, ya que puede resultar falso positivo. El alambre de nichrone no interfiere en el resultado de la prueba.
2.La prueba debe realizarse en cultivos de 18- 24 horas; cultivos más viejos pueden perder su actividad de catalasa dando una reacción falsa negativa.
3.El H2O2 es extremadamente acústico, por lo que se debe evitar que toque la piel, en caso que ocurra inundar el área afectada con alcohol de 70% para neutralizar la acción. NO DEBE USARSE AGUA.
Interpretación
•Prueba cualitativa:
La aparición rápida y prolongada de burbujas, de gas o efervescencia son indicativas de catalasa positiva. Algunas bacterias poseen enzimas diferentes a la catalasa que descomponen el H2O2, dando pocas burbujas diminutas durante 20- 30’, éstas no son catalasa positivas.
VI.PRUEBA DE LA CITOCROMO – OXIDASA
Los citocromos son hemoproteínas que contienen hierro y actúan como el último eslabón de la cadena respiratoria aerobia, transfiriendo electrones (H) al oxígeno con formación de agua. El sistema citocromo se encuentra en los organismos aerobios o anaerobios facultativos, permitiendo identificar a organismos que carecen de la enzima o son anaerobios estrictos.
En el laboratorio se hace reaccionar la bacteria con un sustrato oxidable como el dimetil o tetrametil- p- fenilendiamina ( el cual se presenta en solución, discos o tiras llamados comúnmente oxidasa).
MATERIAL
-Cepa control: sembrada en Agar nutritivo
-Reactivo de oxidasa
PROCEDIMIENTO
1.Directo: Se añaden a las placas sobre la bacteria dos o tres gotas del reactivo
2.Indirecto:
Se toma con el asa un poco de la colonia bacteriana y se extiende sobre los discos o tiras de papel que tienen ya el reactivo de oxidasa
INTERPRETACIÓN
Las colonias bacterianas con actividad Citocromo oxidasa desarrollan inmediatamente un intenso color azul oscuro.