Prueba de laboratorio 2

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Aplicaciones de la espectrofotometría a la bioqca y biología molecular: la mayoría de las sustancias a cuantificar en bioqca no posee color. Por lo tanto es necesario acoplar algún tipo de rx qca q involucre la aparición o desaparición de un cromógeno con la sustancia a cuantificar. General% se escogen cromógenos cuyo coeficiente absortividad molar sea alto ya que mayor será la absorbancia medir y por lo tanto la técnica tendrá mayor sensibilidad. Las concentraciones de soluciones conocidas que se preparan para este propósito se conocen como patrones o estándar.Desviación de la ley de beerLa () de la solución a medir es muy elevada- la luz incidente no es monocromática-la cantidad de luz absorbida por el solvente es significativa con respecto a la sustancia que se desea medir-hay luz trasmitida que no es generada a partir de la sustancia a cuantificar-los lados de la celda donde se deposita la muestra son paralelos-mezcla de varias especies qca. Que se absorben luz de la misma longitud de onda, las especies compitieron entre si por la luz cada una con diferente absortividad.Espectroscopia de fluorescencia: la fluorescencia es un proceso de emisión en el cual las moléculas son excitadas por la absorción de radiación electromagnética. Las especies excitadas se relajan al estado fundamental, liberando su exceso de E en forma de fotones. Una vez excitada la molécula pasara al modo vibraciones de menor E del estado excitado. El foton emitido por la fluorescencia tiene menor E que el absorbido. Por lo tanto posee una frecuencia menor y emite a mayor longitud de onda.Teoría de la fluorescencia molecular: spin del electron:el principio de exclusión de Pauli postula q en un átomo no puede haber dos electrones con los 4 N° cuantico iguales.Cuando esto ocurre se dice que los electrones están apareados y el momento magnético producido por el spin es cancelado siendo la molécula otra magnetica.cuando los pares de electrones se encuentran apareados se les llama estado de singuleter. Los radicales libres q contienen electrones desapareados tienen un momento magnético y consecuentemente son atraídos en un campo magnético, los radicales libres se dice q son por lo tanto para magnéticas.



.Instrumentos para la fluorescenciaFuente : se necesita una fuente más intensa que las lámparas de volframio o de deuterio utilizadas para las medidas de absorción, ya que la magnitud de la señal de salida y por lo tanto la sensibilidad es directa% proporcional a la potencia de la fuente.Filtros o monocromadores: en los fluorimetros se utilizan tantos filtros de interferencia como los de absorción, mientras q los espectrofluorimetro están equipados con monocromadores de red. Detectores: la señal de fluorescencia típica es de baja intensidad, por lo tanto se necesitan factores de amplificación altos para estas medidas. Los tubos fotomultiplicadores son los más utilizados. Cubetas: se utilizan cubetas cilíndricas como rectangulares fabricadas con vidrio o normal% de sílice.Aplicaciones de la fluorescencia: en general los métodos de fluorescencia son de 1 a 3 ordenes de magnitud mas sensibles q los métodos basados en absorción ya q la sensibilidad de los primeros se puede reforzar aumento la E de haz de excitación o por amplificación de la señal de detector.La fluorescencia se utiliza para: detección y cuantificación de sustancias separadas por cromatografía de líquidos- detección y cuantificación de especies inorgánicas y orgánicas difíciles de detector por espectroscopia UV visible.- especies posibles de detectar por fluorescencia-compuestos orgánicos y bioqcos: vitaminas hormonas, aac aromáticos ATP.-compuestos inorganicos:sianuro, fluoruro, fosfatos, selenio, uranio etc.

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