Procedimiento para tejidos fijados en formol e incluidos en parafina (FFPE) y otras muestras biológicas
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Resumen
El documento describe cómo preparar para análisis moleculares los tejidos fijados en formol e incluidos en parafina (FFPE), muy útiles en estudios retrospectivos, y explica sus limitaciones. También recoge procedimientos para muestras de cultivos de bacterias y levaduras, células de la mucosa oral y esputo. Un estudiante aprenderá los pasos básicos de cada tipo de muestra.
Puntos clave
- Los tejidos FFPE sirven para estudios retrospectivos, pues permiten obtener información de tiempos pasados.
- El ADN de los tejidos FFPE se fragmenta durante la fijación, y la calidad de los ácidos nucleicos suele ser peor que en tejidos frescos.
- El procedimiento para tejidos FFPE incluye cortar con microtomo, desparafinar con xilol y rehidratar con etanol.
- Los cultivos líquidos se centrifugan para eliminar el medio y el pellet se resuspende en tampón; las colonias sólidas se recogen con asa estéril y se resuspenden en tampón.
- Las células de la mucosa oral pueden obtenerse por raspado con cepillo, enjuague con solución conservante o recogida directa de saliva.
- El esputo se fluidifica con un agente mucolítico (NALC) en disolución de citrato sódico antes de detectar microorganismos patógenos.
2.4 Tejidos fijados en formol e incluidos en parafina
El tejido en formol incluido en parafina o tejidos FFPE (formalin-fixed paraffin-embedded) es un material muy útil para la realización de estudios retrospectivos (aquellos de los que podemos sacar información de un tiempo pasado).
-La calidad de los ácidos nucleicos recuperados suele ser peor que la de aquellos purificados a partir de tejidos frescos.
-El ADN se fragmenta durante el proceso de fijación
Procedimiento:
-Cortar con el microtomo
-Desparafinar (xilol)
-Rehidratar (etanol)
Procedimiento:
Finalmente, el tejido desparafinado y rehidratado se somete a una homogeneización química similar a la descrita para tejidos frescos.
2.5 Otras muestras
Cultivos de bacterias y levaduras
-Cultivos en medio líquido:
-Se centrifuga el tubo para eliminar el medio de cultivo sobrenadante.
-El pellet se resuspende en el tampón de suspensión.
-Colonias aisladas sobre un medio sólido:
-Se recoge una colonia de la superficie de la placa con un asa de siembre estéril.
-Se resuspende la colonia en el tampón de suspensión.
Células de la mucosa oral
En el mercado se encuentran soluciones y kits comerciales para la recogida y conservación de este tipo de células.
Existen diversos sistemas de obtención:
-Mediante raspado de la mucosa oral con cepillo. Directamente se sumerge el cepillo en una solución conservante para que las células se desprendan.
-Mediante enjuague con una solución conservante.
-Recolectando directamente saliva.
Esputo
El esputo puede usarse como material de partida para detectar o confirmar la presencia de microorganismos patógenos causantes de infecciones respiratorias.
El pretratamiento consiste en la fluidificación con un agente mucolítico (NALC) en una disolución de citrato sódico.
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PDF Word HTMLPreguntas frecuentes
¿Por qué los tejidos FFPE son útiles para estudios retrospectivos?
Porque permiten obtener información de un tiempo pasado a partir de tejidos ya fijados y conservados. Sin embargo, la calidad de los ácidos nucleicos que se recuperan suele ser inferior a la de los tejidos frescos.
¿Qué pasos se siguen para preparar un tejido FFPE?
Primero se corta el tejido con el microtomo, después se desparafina con xilol y finalmente se rehidrata con etanol. Después se somete a una homogeneización química similar a la de los tejidos frescos.
¿Cómo se obtienen células de la mucosa oral?
Se puede raspar la mucosa con un cepillo sumergido en una solución conservante, enjuagar con una solución conservante o recoger directamente la saliva.
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