Procediment per a la detecció de leishmaniasi i treponema en frotis

Procediment per a la detecció de leishmaniasi

1. Posar 1 de reactiu de leishmaniasi i 2 de solució tampó.

2. Col·locar en el spots de la placa 5 ul de suero de control leishmania + en el a1, i en el a2 5ul del control – i a partir del A3 5 ul de les mostres a investigar.

3. Posar 100 ul de reactiu diluït a cada potet que tingui suero i mesclar bé abans de afegir.

4. Agitar la placa en el agitador durant 15/20 segons a 900 o 1100 rpm.

5. Cobrir la placa i incubar-la lliure de moviment i a temperatura ambient (15/25 graus i llegir després de 2 a 24 hores.

Investigació del treponema en frotis

Utilitzarem els següents mètodes:

• Mètode ràpid
• Mètode de Fontana-Tribondeau
• Variant d’Aixelà
• Coloració negativa dels treponemes amb la tinta xinesa

Mètode ràpid

1. Assecar les extensions a l’aire i fixar la preparació amb alcohol-èter.

2. Acolorir amb el colorant de Giemsa, preparat així.

En una proveta es mesclen:

• Solució de Giemsa. 10 gotes.
• Aigua destil·lada. 10 ml.
• Solució de carbonat de sosa a l’1‰ 10 gotes.

Rebreix la preparació amb el colorant, escalfant-la fins que es produeixin vapors. Repetir-lo dues vegades més. Rentar amb aigua. Assecar. Examinar amb l’objectiu de 100X.

Observacions: L’spirochœte refringens, freqüent a nivell de les ulceracions mucoses, és més gruixut i presenta espires menys nombroses i més amples.

Mètode de Fontana-Tribondeau

Material:

• Mostra
• Portaobjectes rentats amb alcohol
• Bunsen i aigua destil·lada
• Solució de Ruge
• Alcohol absolut
• Solució tànica
• Solució de nitrat argèntic amoniacal (solució de Fontana)

Mètode:

1. Fer les extensions; assecar-les a l’aire, sense escalfar-les, i sense fixar-les.

2. Deshemoglobinitzar el frotis cobrint-lo dues o tres vegades amb la solució de Ruge, escorrent.

3. Rentar amb alcohol, gota a gota sobre la preparació que es tindrà inclinada. Escórrer.

4. Col·locar algunes gotes més d’alcohol sobre l’extensió i inflamar-les.

5. Cobrir l’extensió amb solució tànica. Escalfar suaument sobre la flama, evitant l’ebullició; retirar de la flama, quan apareguin clarament vapors; deixar actuar el líquid calent durant trenta segons. Escórrer.

6. Rentar amb aigua durant trenta segons. Escórrer.

7. Cobrir el frotis amb solució de Fontana. Escalfar com en el paràgraf cinquè. Deixar que actuï durant quinze segons el líquid calent. Escórrer.

8. Rentar amb aigua destil·lada. Alguns segons. Escórrer.

9. Assecar, amb paper de filtre, primer i, després, agitant la preparació per sobre de la flama.

10. Muntar amb D.P.X i examinar la preparació amb l’objectiu de 100X.

Observacions: Les espiroquetes apareixen intensament negres.

Coloració negativa dels treponemes amb la tinta xinesa

Mètode:

1. Posar, en un tub d’assaig, una gota d’aigua destil·lada, i en aquesta gota una goteta de la mostra a investigar.

2. Afegir amb una pipeta una goteta de tinta xinesa. Es mescla.

3. Fer extensions.

4. Assecar el portaobjectes i no aplicar el cobreobjectes.

5. Examinar amb l’objectiu d’immersió.

Observacions: Un fons negre o gris uniforme. En aquest fons apareix el perfil i la silueta de nombrosos microorganismes, cèl·lules i treponemes.

Malalties

Febre de malta o Brucel·losi = Reactiu Borbotus Salmonel·la A= AO Salmonel·la A= AH Salmonel·la B= BO Salmonel·la B= BH Salmonel·la C= CO Salmonel·la C= CH , Salmonel·la Thyphoyde = O Salmonel·la Thyphoyde= H Proteus= OXK, Proteus= OX2,Proteus= OX19.

Serologia reumàtica:

1. Artritis reumatoide: L'artritis reumatoide és una forma d'artritis que causa dolor, inflamació, rigidesa i pèrdua de la funció de les articulacions. Pot afectar qualsevol articulació, però és comú als canells i els dits.
2. Febre reumàtica aguda: La febre reumàtica és una malaltia inflamatòria que es pot presentar després d'una infecció amb bacteris estreptococs del grup A (com la faringitis estreptocòccica o l'escarlatina). Pot causar una malaltia greu en el cor, les articulacions, la pell i el cervell.

Serologia febril:

1. Febre botonosa mediterrània: La febre botonosa mediterrània, també anomenada tifus de la paparra, és una malaltia infecciosa aguda i zoonòtica causada pel bacteri Rickettsia conorii i transmesa per la paparra marró del gos Rhipicephalus sanguineus. Aquesta febre és endèmica en molts països de la conca del mediterrani.
2. Febre tifoide: La febre tifoide o febre entèrica és una malaltia infecciosa produïda per uns bacteris anomenats Salmonella typhi (Bacil d'Eberth) o Salmonella paratyphi, serotips A, B o C.
3. Febre de malta/Brucel·losi: És una malaltia infecciosa que passa pel contacte amb animals que porten el bacteri brúcela.
4. Leishmaniasi: 1-Leishmaniasi visceral: La leishmaniosi visceral, també coneguda com kala-azar, és una malaltia infecciosa produïda per un protozou paràsit del gènere Leishmania. 2-Leishmaniasi cutània: La leishmaniosi cutània afecta la pell i les membranes mucoses. Les nafres a la pell regularment comencen en el lloc de la picada del flebòtom. En algunes persones, es poden desenvolupar llagues a les membranes mucoses.
5. Treponema en frotis: Angina de Vicents: L'angina de Vincent o gingivitis ulcerativa / ulcerosa necrosante és una infecció polimicrobial de les genives i les papil·les interdentals, que produeix inflamació, sagnat, teixit ulcerós i necròtic acompanyat per febre, amigdalitis, limfadenopatia i halitosi.