Tipaje HLA serológico y prueba cruzada (cross-match) en trasplantes

Resumen

El texto explica las técnicas serológicas para identificar moléculas HLA en linfocitos, en especial el test de microlinfocitotoxicidad mediado por complemento y sus métodos de lectura con fluorocromos o azul tripán. Después describe la prueba cruzada o cross-match, su utilidad para detectar anticuerpos anti-HLA en pacientes en lista de espera, las causas de sensibilización y cómo la monitorización del porcentaje de reactividad afecta a las posibilidades de trasplante.

Puntos clave

Las técnicas serológicas identifican los tipos de moléculas HLA presentes en las membranas de los linfocitos.
En la microlinfocitotoxicidad, los anticuerpos anti-HLA se unen a las moléculas HLA y activan el complemento, lo que lisa la célula en una reacción positiva.
Las células vivas se distinguen de las lisadas con fluorocromos (naranja de acridina y bromuro de etidio) o con azul tripán.
La prueba cruzada detecta anticuerpos específicos contra alelos HLA en el suero del paciente y puede provocar rechazo hiperagudo.
Una lisis superior al 20% en la prueba cruzada se considera positiva y contraindica el trasplante.
Los anticuerpos anti-HLA pueden originarse por embarazo, transfusiones o trasplantes previos.

Ponte a prueba

Tipaje HLA por Técnicas Serológicas

Las técnicas serológicas se realizan para identificar los tipos de moléculas HLA presentes en las membranas celulares de los linfocitos.

Método de Microlinfocitotoxicidad Mediada por Complemento

Fundamento de la Técnica

El método más utilizado es el test de microlinfocitotoxicidad mediado por el complemento. La técnica se basa en la incubación en pocillos de las células problema con una batería de antisueros que contienen anticuerpos anti-moléculas HLA específicas. Los anticuerpos (Ac) se unirán a las moléculas HLA de la superficie de las células, en caso de reacción positiva, y activarán el sistema del complemento. El depósito de complemento sobre la membrana de las células producirá su lisis.

Células Empleadas

Las células empleadas habitualmente son los linfocitos.

Detección de Lisis Celular (Fluorocromos)

Para determinar si las células están lisadas (reacción positiva) o vivas (reacción negativa), se añaden dos fluorocromos que se intercalan en el ADN de las células: el naranja de acridina (tiñe las células muertas), que emite fluorescencia roja, y el bromuro de etidio (tiñe todas las células), que emite fluorescencia verde.

Al observar los pocillos con un microscopio de fluorescencia invertido, se puede determinar en cada uno de ellos si las células están vivas (fluorescencia verde), indicando una reacción negativa, o lisadas (fluorescencia roja que enmascara a la verde), indicando una reacción positiva.

Detección de Lisis Celular (Azul Tripán)

También se puede realizar añadiendo el colorante vital azul tripán y dejándolo actuar durante 10 minutos. Este teñirá los linfocitos muertos, pero no los vivos. La lectura se realiza con el microscopio invertido.

Interpretación del Resultado

El resultado es positivo cuando el anticuerpo anti-HLA del pocillo se une al antígeno HLA correspondiente en la membrana de los linfocitos y se ha producido la lisis celular.

Prueba Cruzada o Cross-match

Objetivo y Relevancia

La prueba cruzada o cross-match se utiliza para determinar la presencia de anticuerpos (Ac) específicos contra alelos del HLA en el suero de pacientes en lista de espera para trasplante. La existencia de estos Ac puede provocar un rechazo hiperagudo.

Causas de Sensibilización

Estos anticuerpos anti-HLA se pueden producir durante el embarazo, por transfusiones sanguíneas o trasplantes anteriores.

Procedimiento e Interpretación

Procedimiento: Se realiza un ensayo de citotoxicidad entre el suero del paciente y las células del donante. Si se observa una lisis superior al 20%, se considera una prueba cruzada positiva. En este caso, el trasplante estará contraindicado.

Monitorización y Sensibilización del Paciente

La monitorización periódica de la presencia de anticuerpos (Ac) anti-HLA en el suero de pacientes en lista de espera para trasplante es uno de los grandes avances. Se efectúa evaluando el porcentaje de reactividad de los sueros frente a células de un panel. Este panel celular linfocitario es representativo de los antígenos HLA de la población.

Cuanto mayor sea el porcentaje de linfocitotoxicidad de un paciente, más sensibilizado se encuentra y menor será la posibilidad de obtener un resultado negativo en una prueba cruzada con un potencial donante. Por lo tanto, tendrá menores posibilidades de ser trasplantado.

Preguntas frecuentes

¿Qué es la prueba cruzada o cross-match en un trasplante?

Es un ensayo de citotoxicidad entre el suero del paciente y las células del donante que determina si existen anticuerpos específicos contra alelos HLA. Si la lisis supera el 20%, la prueba es positiva y el trasplante está contraindicado.

¿Qué causa la sensibilización frente al HLA?

Según el texto, los anticuerpos anti-HLA pueden producirse durante el embarazo, por transfusiones sanguíneas o por trasplantes anteriores.

¿Cómo se distinguen las células vivas de las lisadas en la microlinfocitotoxicidad?

Con fluorocromos, las células vivas muestran fluorescencia verde y las lisadas fluorescencia roja que enmascara a la verde. También puede usarse azul tripán, que tiñe solo los linfocitos muertos.