Meningitis

ANTIBIÓTICOS:
Definición: Toda sustancia de origen natural, sintética o semisintética, que actúa inhibiendo los microorganismos a una baja concentración, y ejerce su acción a nivel molecular en un proceso metabólico o en una estructura concreta de un microorganismo.
(Garrod 1981).
En relación con el tipo de microorganismo que inactivan, los antimicrobianos se clasifican en:
- Antibacterianos          - Antivíricos
- Antifúngicos               - Antiprotozoarios
Requisitos para que una sustancia se considere antimicrobiano: Un antimicrobiano, para ser considerado como tal (y diferenciarse de antisépticos y desinfectantes), ha de reunir las siguientes carácterísticas: Especificidad, elevada potencia biológica, toxicidad selectiva
-Especificidad: Los antimicrobianos ejercen su acción de forma específica sobre alguna estructura o función microbiana.  
-Elevada potencia biológica: Es decir, que inhiben o destruyen microorganismos a muy baja concentración.  
-Toxicidad selectiva: Es decir, una muy alta toxicidad para los microorganismos susceptibles y una mínima toxicidad para las células eucariotas del organismo.
CLASIFICACIÓN DE LOS ANTIMICROBIANOS (ANTIBACTERIANOS)
Según origen
– Natural o  biológico: Cuando  son  obtenidos  a partir  de  microorganismos.  Ej:  polimixina, cloranfenicol,     penicilina, gentamicina.

– Sintéticos: procesos cefalosporinas, Se obtienen de manera de  síntesis  química, total por como  las sulfamidas, el metronidazol y las quinolonas.
-Semisintéticos: son  los  más  numerosos.  En este  caso,  el  núcleo  fundamental  de un determinado  antimicrobiano,  producido  por un  microorganismo,  se  modifica  en el laboratorio para conseguir unas propiedades diferentes  que  mejoren  el  espectro,  las carácterísticas farmacocinéticas o disminuyan los   efectos   secundarios:   -lactámicos, aminoglicósidos  y  macrólidos  son  fármacos semisintéticos.
Según efecto
– Bacteriostáticos:  las  concentraciones  que alcanza en suero y tejidos impiden el desarrollo y multiplicación de las bacterias sin destruirlas.
– Bactericidas: su acción es letal, produciendo la lisis bacteriana, con efectos irreversibles.
Según espectro de acción
– De amplio  espectro:  activos  sobre  un  número amplio de especies bacterianas (tetraciclinas).
– De espectro intermedio: presentan acción sobre un número limitado de especies (macrólidos).
– De espectro reducido: moléculas que solamente son  activas  sobre  un  pequeño  número  de especies bacterianas (glucopéptidos).
Según mecanismo de acción 
- Por inhibición de la síntesis de la pared bacteriana. 
- Por alteración de la permeabilidad de la membrana citoplásmica de la bacteria.

- Por inhibición de la síntesis proteica. 
- Por bloqueo de la síntesis de los ácidos nucleicos. 
- Por interferencia de las vías metabólicas.

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS 
ANTIBIOGRAMA
El estudio de la sensibilidad o susceptibilidad de las bacterias a los antibióticos, es necesario porque: 
- El espectro de actividad de los antimicrobianos es limitado 
- Orientar adecuadamente las decisiones terapéuticas 
- Seguir la evolución de las resistencias bacterianas: 
    -Seguimiento epidemiológico 
    -Adaptación de la antibioterapia empírica 
    -Programas de prevención en hospitales y atención primaria.
La determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI), es la base de la medida de la sensibilidad de una bacteria a un determinado antibiótico.

-CMI : Es la mínima cantidad de antimicrobiano capaz de impedir  (inhibir)  el  crecimiento  de  los  microorganismos presentes en una muestra inoculada (prueba in vitro).
-CMB : Es la mínima cantidad de antimicrobiano capaz no sólo de inhibir el crecimiento, sino de destruir el 99.9% de los microorganismos presentes en una muestra inoculada.
Los resultados obtenidos en el estudio de la CMI permiten clasificar a los microorganismos en diferentes categorías: Sensible (S), Resistente (R), Intermedio (I)
- Sensible : Cuando la CMI de un antibiótico para una bacteria se  puede  conseguir  in  vivo  con  dosis  terapéuticas  y  la experiencia ha demostrado su eficacia, existiendo una buena probabilidad de éxito terapéutico. CMI del antibiótico para la bacteria ≤ Concentración que se alcanza in vivo con dosis terapéuticas. 
- Resistente : Cuando el microorganismo no es inhibido por los niveles que normalmente se pueden obtener in vivo con dosis  terapéuticas,  siendo  nulo  o  muy  reducido  el  éxito terapéutico. CMI del antibiótico para la bacteria > Concentración que se alcanza in vivo con dosis terapéuticas.
- Intermedio: Cuando las bacterias se inhiben a concentraciones que no se alcanzan con dosis terapéuticas pero que pueden alcanzarse con dosis más altas sin necesidad de ser tóxicas o cuando el antibiótico se encuentra a altas concentraciones en el lugar de la infección, generalmente en las vías de eliminación. Para cada combinación microorganismo antimicrobiano existen unos valores según los cuales el microorganismo es sensible, de resistencia intermedia o resistente a este antimicrobiano.
TÉCNICAS DE DETERMINACIÓN DE LA CMI y CMB 
PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA
– Se realizan en condiciones estandarizadas por organismos internacionales (CLSI),
– El inóculo para el método por dilución debe ser de 5x105 ufc/ml
– Medio Mueller-Hinton
– Puntos de corte establecidos para los antibióticos
– Razonable correlación con la respuesta clínica
Métodos por dilución
– Consiste en determinar el crecimiento de una bacteria en presencia  de  concentraciones  decrecientes  (generalmente diluciones 1:2) de un antimicrobiano
– Los  agentes  antimicrobianos  se  preparan  en  “soluciones madre” concentradas y luego se diluyen en caldo Mueller- Hinton hasta obtener las concentraciones apropiadas.
– El inóculo bacteriano debe proceder siempre de un cultivo puro, y se realiza sembrando unas colonias en caldo Mueller Hinton a 37ºC 18-24 h. 
CMI: la concentración más baja de antibiótico que presente ausencia de crecimiento, detectada por falta de turbidez.
Dilución en tubo
- Una vez conocida la CMI, se siembra una cantidad conocida de inóculo de aquellos tubos que no presenten turbidez, en placas de agar.
El nº de
colonias que crece se compara con las ufc/ml del cultivo original. 
- CMB: la mínima concentración de agente antibacteriano que destruye al 99,9% de la población bacteriana.
Microdilución 
Ventajas: 
- Probar simultáneamente la sensibilidad del microorganismo aislado a varios agentes antimicrobianos. 
- Automatización mediante autoanalizadores de turbidez o fluorescencia. 
Desventajas: 
- Sólo se pueden investigar microorganismos de crecimiento rápido y que no tengan requerimientos nutricionales especiales.
Métodos por difusión
– Los métodos por difusión del antibiótico en el agar, se idearon para poder ensayar fácilmente la sensibilidad de un microorganismo frente a múltiples antibióticos a la vez.
– Se distinguen dos métodos por difusión: 
   • Método Kirby-Bauer (1966) o de difusión técnica cualitativa. 
   • Método E-test. Técnica cuantitativa.
DIFUSIÓN AGAR 
•Disco Difusión en agar o Kirby-Bauer 
-No es cuantitativo (pues no conocemos la CMI) 
-Discos de papel impregnados de un  antibiótico problema 
-Halos de inhibición en torno al disco. 
• E (épsilon)-test 
-Cuantitativo (pues conocemos la CMI) 
-Tiras de plástico con gradiente conocido de antimicrobiano.
ANTIBIOGRAMA POR DISCO DIFUSIÓN 

1. Preparación del inóculo y siembra: La  técnica  de  antibiograma  sólo  es aplicable a especies bacterianas  en  cultivo  puro.  Por ello, previamente se procederá, si es preciso, a hacer un aislamiento en placa. 

Material

- Tubo con 10 ml de solución salina.

- Cultivo en placa de la bacteria problema. 

Técnica 

Cultivar la bacteria aislada 24h en un tubo de medio líquido apropiado  (caldo  nutritivo,  infusión  cerebro-corazón)  o preparar una suspensión directa a partir del cultivo en placa usando el siguiente método:

Tomar unas colonias aisladas y resuspender con hisopo en el tubo de solución salina frotando en la pared del tubo. 

Homogeneizar bien y ajustar la densidad óptica con un patrón de turbidez n° 0.5 de McFarland (108 UFC/ml aprox.) Impregnar  una  torunda  con  la  suspensión  del  inóculo; escurrirla contra la pared del tubo y sembrar con ella toda la superficie  de  la  placa,  mediante  estrías  cruzadas  en  varias direcciones.

Siembra y colocación de los discos

Material 

Placas con medio de cultivo Müeller-Hinton, hisopo, pinzas o aplicador  automático  y  discos  de  6  mm  de  diámetro impregnados con antibiótico.

Técnica 

Antes de 15 minutos deben colocarse los discos de antibióticos. Con pinzas flameadas y frías (o con un aplicador automático) se disponen los discos sobre las placas, de forma que disten unos 15 mm del borde de la placa y unos 30 mm entre sí (en una placa de 9 cm caben 6 discos). 

Adherir cada disco al agar presionando ligeramente con las pinzas. A los 15 minutos se llevan a incubar, invertidas, a 37ºC.

Lectura de los resultados

Se realiza a las 18-24 horas. Medir  el  diámetro  de  los  halos  con calibrador    o    regla    graduada, considerando la zona que esté libre de crecimiento     (en     caso     de bacteriostáticos es aceptable un ligero velo dentro del halo). La presencia de colonias en el interior del halo indica contaminación, cultivo mixto o aparición de resistencia. 

Consultar las tablas con los patrones estándar de los diámetros de los  halos  de  inhibición  (en  mm)  que  interpretan  si  el microorganismo en S, I o R .

ANTIBIOGRAMA POR E-TEST 

Es una prueba de sensibilidad por difusión en agar cuantitativa. La técnica de preparación de inóculo y siembra es la misma. 

A  través  de  una  tira  graduada  que  contiene  concentraciones crecientes  de  un  antibiótico,  podemos  conocer  la  CMI: concentración mínima inhibitoria del antibiótico a estudiar frente a dicho microorganismo. 

La zona de inhibición del crecimiento (en forma de elipse) que corta en la escala graduada de las concentraciones del antibiótico, determinan el valor de la CMI

MECANISMOS DE RESISTENCIA DE LAS BACTERIAS A LOS ANTIBIÓTICOS

Desde  el  momento  en  que  los  agentes  antimicrobianos fueron introducidos en el arsenal terapéutico humano y animal, se pudo observar la presencia de resistencias en las bacterias. 

Una  bacteria  es  resistente  a  un  antibiótico  cuando  no puede alcanzarse la concentración de antibiótico capaz de destruirla  o  detener  su  crecimiento,  en  el  foco  de  la infección. Según esto, la bacteria es resistente cuando la CMI del antibiótico es superior al nivel que este puede alcanzar en dicho foco infeccioso.

TIPOS DE RESISTENCIAS 

- Natural :    Resistencia    que    poseen    ciertos microorganismos contra ciertos antimicrobianos de forma  natural.  Ejemplo:  las  enterobacterias  y Pseudomonas son resistentes a la penicilina y a la eritromicina. 

- Adquirida :   Debida   a   mecanismos   bacterianos específicos y activos de la propia célula procariota.

BASES GENÉTICAS DE LA RESISTENCIA BACTERIANA 

La resistencia a los antimicrobianos se debe a cambios en  el  ADN  bacteriano,  existiendo  dos  tipos  de resistencias: R. Cromosómica, R. Extracromosómica o plasmídica

Resistencia cromosómica 

- Se debe a una mutación de los genes que controlan, a diferentes niveles, la sensibilidad a los antibióticos. 

- Espontánea 

- Escasa frecuencia 

- Afecta a un determinado carácter

- Hereditaria 

- Aparece tras el contacto con el antibiótico, que selecciona las cepas resistentes

-En un solo escalón: la bacteria se hace inmediatamente resistente. (Estreptomicina)

-En varios escalones: las bacterias van aumentando las  CMIs  del  antibiótico  a  lo  largo  de  varias generaciones. (Penicilina).

R. Extracromosómica o plasmídica 

- Codificada por plásmidos de resistencia, que pueden pasar de una a otra bacteria por conjugación o transducción. 

- Adquirida

- Frecuente 

- Hereditaria o no 

- Transferible 

- No necesita contacto previo con el antibiótico (no necesita selección) 

- Puede ser resistencia múltiple a diversas familias de antimicrobianos e incluso desinfectantes.

MECANISMOS DE RESISTENCIA 

POR ALTERACIONES DE LA PERMEABILIDAD O TRANSPORTE

- Modificaciones de las porinas 

- Menor tasa de entrada del antibiótico, por proteínas que impiden la entrada del fármaco. 

- Mecanismo de salida o flujo. El fármaco penetra en la bacteria pero es rápidamente expulsado. 

- Alteraciones iónicas, del LPS de la pared o del transporte.

MODIFICACIONES ENZIMÁTICAS DE LOS ANTIBIÓTICOS

a) Betalactamasas.  Enzimas  bacterianas  que  hidrolizan  los antibióticos  betalactámicos   (ej:   amoxicilina,   penicilina, cefalosporinas) 

B) Enzimas   inactivadoras   de   aminoglicósidos. (ej: estreptomicina, gentamicina)

C) Cloranfenicoltransferasas. Una acetiltransferasa modifica el cloranfenicol

RESISTENCIA POR MODIFICACIÓN DE LOS PUNTOS DIANA

Se generan por mutaciones cromosómicas y por plásmidos que modifican “las dianas” de los antibióticos, haciendo que éstos, pierdan afinidad: 

- Modificaciones en las PBPs (Penicillin binding protein) 

- Alteraciones ribosómicas 

- Modificaciones en la ADN girasa 

- Modificaciones en la ARN polimerasa

MODIFICACIONES DE LOS SISTEMAS ENZIMÁTICOS (by pass)

Se  originan  por  mutaciones  que  afectan  a  determinadas rutas metabólicas (cambio de una ruta metabólica), lo que confiere  resistencia  a  la  bacteria,  aunque  el  antibiótico mantenga su acción. 

La  bacteria  desarrolla  la  capacidad  de  activar  una  vía alternativa o by pass.

COCOS GRAM+

PRUEBA DE LA CATALASA 

“Burbujeo” que se produce al verter una gota de peróxido de hidrógeno al 30% sobre una colonia aislada de un microorganismo catalasa positivo. La enzima catalasa, al contacto con peróxido de hidrógeno, convierte a este compuesto en agua y oxígeno.

Dicha enzima sólo la poseen ciertos microorganismos. La prueba de la catalasa es una prueba enzimática usada para la identificación de numerosos microorganismos, pero especialmente para diferenciar Staphylococcus spp.(+) Streptococcus spp. (-) 

Género Staphylococcus 

 CarácterÍSTICAS 

•Cocos Gram (+), agrupados en racimos                                                    

•Catalasa positivos 

•No esporulados               

 •Aerobios y anaerobios facultativos                                

•Inmóviles 

•Toleran altas concentraciones de NaCl                   

•Colonizadores de la piel y mucosa nasal

Crecimiento en Agar Sangre: Hemólisis

La hemólisis alfa se deduce a partir de una zona parda o verdosa alrededor de las colonias.

En la hemólisis beta,las bacterias sintetizan una hemolisina que origina una zona de lisis transparente alrededor de las mismas.

Algunas bacterias crecen en agar sangre sin producir ningún cambio en los GR.

Staphylococcus aureus 

CarácterÍSTICAS

Virulencia: ocasionan enf. Graves en huéspedes normales. Producen muchas toxinas.

Diferencia: enfermedades diversas, en localizaciones diferentes, por distintos mecanismos…multitud de cepas.

Persistencia: tanto en medio ambiente como en el ser humano (portador asintomático)         

Resistencia: a muchos antibióticos (meticilina, penicilina, vancomicina…).

PIÓGENO (productor de pus) 

COLONIAS AMARILLO DORADAS 

PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN 

Catalasa + Coagulasa + 

Hemólisis beta ADNasa + 

Crece en presencia de alto contenido en sal y fermenta el manitol: 

agar manitol salado- agar Chapman. 

PRUEBA DE LA COAGULASA 

 FUNDAMENTO 

S. Aureus contiene enzimas coagulasas que al liberarse, en contacto con el plasma, actúan sobre la protrombina para producir un producto semejante a la trombina, que luego actuará sobre el fibrinógeno para formar un coágulo de fibrina.

PROCEDIMIENTO 

-Incorporar una muestra de cultivo en caldo del día anterior (0,05mL) del m.O de prueba, a un tubo de ensayo conteniendo 0,5 mL de plasma (plasma de conejo). 

-Incubar a 37ºC. Observar presencia de coágulo a las 6 horas. Si no hay coágulo, incubar hasta las 24 h.

-Examinar los tubos inclínándolos periódicamente con suavidad. 

Agar manitol salado o Agar Chapman (selectivo y diferencial)  

PRUEBA DE LA ADNasa 

La actividad ADNasa de S. Aureus se utiliza para identificar los estafilococos potencialmente patógenos. 

-Se inocula una placa de Agar ADNasa (que contiene ADN) con el microorganismo de prueba. Incubar 24 horas a 37ºC.

-Después de la incubación, inundar con suficiente solución de ácido clorhídrico (HCl 1 N) toda la placa y dejar que penetre durante 2 min.

-Después de la aplicación y penetración del ácido clorhídrico en el medio, los organismos positivos (presencia de ADNasa), tal como Staphylococcus aureus, estarán rodeados de zonas transparentes.

Las colonias de organismos con resultado negativo a la ADNasa no presentan zonas transparentes alrededor de las colonias.

Staphylococcus epidermidis

CarácterÍSTICAS 

-Comensal común de piel, nariz y conducto auditivo externo.

-Capacidad de sintetizar un polisacárido “limo”, que puede ser un factor responsable de su adherencia a superficies de plástico y metal, y de su resistencia a la fagocitosis. 

PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN Coagulasa (-), Sensible a novobiocina 

CLÍNICA 

-Infecciones asociadas con dispositivos protésicos. Pueden infectar válvulas cardíacas (endocarditis), producir infecciones en catéteres, prótesis articulares…

-Bacteriemia 

Staphylococcus saprophyticus

CLÍNICA Responsable de hasta el 10-20% de infecciones urinarias en mujeres jóvenes. PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN Coagulasa (-) y  Resistente a la novobiocina.

SENSIBILIDAD/ RESISTENCIA A NOVOBIOCINA 

Para conocer cómo comporta un m.O frente a un antibiótico, utilizamos un ANTIBIOGRAMA. 

El microorganismo podrá ser:

- SENSIBLE (S) al antibiótico (el microorganismo muere o se ve inhibido su crecimiento)

- RESISTENTE (R) al antibiótico (no le hace efecto y puede seguir multiplicándose) UTILIZAMOS EL COMPORTAMIENTO DE DETERMINADOS MICROORGANISMOS FRENTE A ALGUNOS ANTIBIÓTICOS PARA SU IDENTIFICACIÓN. 

SENSIBILIDAD/ RESISTENCIA A NOVOBIOCINA 

SIGUIENDO LA TÉCNICA DE ANTIBIOGRAMA POR DISCO- DIFUSIÓN O KIRBY BAUER, 

OBSERVAMOS: 

S. Epidermidis S 

S. Saprophyticus R

GÉNERO STREPTOCOCCUS

CarácterÍSTICAS GENERALES 

• Amplio grupo de microorganismos.

• Algunos forman parte de la flora comensal normal, otros son patógenos para el hombre y los animales.

• Cocos Grampositivos               • Catalasa (-) • Aerobios, anaerobios facultativos.

• Son exigentes nutricionalmente por lo que requieren medios enriquecidos para su cultivo.

Clasificación: Varios sistemas 

Patrones de Hemólisis

Pruebas bioquímicas: Sensibilidad a la bacitracina, optoquina, fermentaciones, hidrólisis de compuestos, etc

Moleculares (RNA 16s)

Grupos de Lancefield (Rebecca de Lancefield 1895-1981)

Utilizando reacciones serológicas (aglutinación, precipitación o Ac marcados) clasificó a los estreptococos patógenos en base a este antígeno de grupo , el carbohidrato C de la pared. Los grupos de Lancefield se nombran de la A-W (con la excepción de la I y la J).

Estreptococos “no viridans” (o piógenos) 

Grupo A S. Pyogenes (beta hemólisis) 

Grupo B S. Agalactiae (beta hemólisis)

Grupo D Enterococcus faecalis, S. Bovis (variable) 

Streptococcus pyogenes 

CarácterÍSTICAS 

• Serogrupo A de Lancefield. 

• Se conocen más de 80 serotipos. 

• Hemólisis beta. 

• Sensible a Bacitracina 

• 10% de portadores rinofaríngeos sanos.

POSEE NUMEROSOS FACTORES DE VIRULENCIA: TOXINAS 

• Eritrogénica: responsable del exantema de la escarlatina 

• Hemolisinas: lisis de los eritrocitos 

• Estreptolisina S: resistente al O2 y responsable de la hemólisis beta. No antigénica. •Estreptolisina O: lábil al O2 y antigénica. Determina el título ASLO ( Antiestreptolisina O, útil para el diagnóstico de la fiebre reumática).

ENZIMAS: hialuronidasa, estreptodornasa, estreptoquinasa, etc.

 INFECCIONES DE PIEL Y TEJIDO SUBCUTÁNEO:

-IMPÉTIGO-ERISIPELA-CELULITIS-FASCITIS NECROTIZANTE

 INFECCIONES RESPIRATORIAS:

-FARINGOAMIGDALITIS

-ESCARLATINA: dx un sarpullido rojo en la piel que suele iniciarse en axilas e ingles,tras una faringo amigdalitis por S.Pyoneses productor de toxina eritrogénetica.

INFECCIONES SISTÉMICAS Septicemia Meningitis
Neumonía COMPLICACIONES INMUNOLÓGICAS Fiebre reumática Glomerulonefritis aguda

Streptococcus agalactiae 

• Serogrupo B de Lancefield. 

• Hemólisis beta. • Resistente a Bacitracina.

• CAMP + • Hábitat: rinofaringe, intestino, vagina.

INFECCIONES

Produce infecciones neonatales (neumonía, sepsis, meningitis) por contaminación del recién nacido en el canal del parto (control en embarazadas semana 33). Principal agente causal de la mastitis bovina generando grandes pérdidas económicas en el ganado lechero.  

Prueba CAMP Descrita por Christie, Atkins y Munch-Petersen (CAMP).

FUNDAMENTO 

Está basada en la potenciación (o sinergia) de la zona de lisis en agar sangre formada por Staphylococcus aureus betahemolítico, por una sustancia denominada factor CAMP, producida por los Streptococcus del grupo B.Es una proteína extracelular que lisa la membrana de los eritrocitos pretratados con Staphylococcus aureus. 

MÉTODO La prueba se realiza en medio agar sangre ovina o bovina.

1. Sembrar una estría espesa de la cepa de Staphylococcus aureus productora de betalisina (o un disco con betalisina estafilocócica) y, perpendicularmente a ella, y a 3 ó 4 mm de distancia, una estría con el Streptococcus problema. 

Incubar en aerobiosis o con atmósfera parcial de C02 a 35-37° C durante 24-48 horas

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS 

Se considera la prueba positiva, si se observa una hemólisis clara en triángulo o «punta de flecha». 

E. Faecalis: NEGATIVO        2. S.Salivarius: NEGATIVO,

S. Agalactiae: POSITIVO      4. E. Durans:

Grupo D 

✓ENTEROCOCOS 

•Enterococcus faecalis 

•Enterococcus faecium 

•Enterococcus durans 

✓NO ENTEROCOCOS 

•Streptococcus bovis 

•S. Equinus

Grupo D: ENTEROCOCOS Crecen en bilis/esculina y en NaCl al 6.5%.

 CLÍNICA 

• Infección urinaria oportunista (se asocia a maniobras invasivas urinarias) 

• Enfermedad del gastrointestinales. Tracto biliar, trastornos 

• Bacteriemia y endocarditis si válvula afectada.

• Infecciones neonatales, pélvicas, meningitis, etc.

Medio Bilis Esculina 

Este medio es selectivo por la presencia de bilis (solo permite el crecimiento de bacterias intestinales) y diferencial porque posee esculina, un compuesto que si el microorganismo es capaz de degradar produce esculentina que se combina con los cationes de Hierro (Fe2+) que posee el medio para formar una sal de hierro que precipita dando al medio color negro, indicando la positividad de la prueba.

Medio NaCl al 6.5%

Cualquier medio de cultivo base adicionado de NaCl (65g/L), se convierte en un medio selectivo. Sólo crecen bacterias que toleren altas concentraciones de sal, como los enterococos. 

Estreptococos “viridans” (alfa hemolíticos):

- Streptococcus pneumoniae

- Streptococcus Grupo viridans: S. Mutans, S. Salivarius, S. Milleri, S.Oralis… 

Streptococcus pneumoniae 

•Crece en parejas (diplococo).

•No produce toxinas.

•Presenta IgAsa.

• Frecuente colonizador de superiores. Vías aéreas 

• Cápsula de efecto antifagocitario (principal factor de virulencia) y que permite la distinción de hasta 90 serotipos gracias a la reacción de Quellung

•Alfa hemolítico.

•Soluble en bilis.

•Sensible a optoquina

• Factores que predisponen a la infección: aspiración (alcohólicos, coma), viriasis respiratorias, tabaco, asplenia, ..

 CLÍNICA 

• Neumonía: principal agente responsable de neumonía extrahospitalaria. 

•Meningitis •Otitis media •Sinusitis •Bacteriemia: bastante común en neumonía y meningitis.

Estreptococos Grupo viridans 

•Alfa hemolíticos.

 •No capsulados. 

•Insolubles en bilis.

 •Resistentes a la optoquina. 

•Producen polisacáridos extracelulares adherentes.

BACILOS GRAM POSITIVOS

PRODUCTORES DE ENDOSPORAS: 

Bacillus spp.                       Clostridium spp. (anaerobio estricto)

BACILLUS spp.

✓Bacilos Gram (+)                 ✓Esporulados (endosporas) 

✓Aerobios o anaerobios facultativos 

✓Especies patógenas:   ✓B. Anthracis     ✓B. Cereus

Bacillus anthracis

▪ Colonias con apariencia de vidrio esmerilado y bordes irregulares. 

▪ No hemolítico en agar sangre (a diferencia de otros Bacillus). 

▪ Crece en aerobiosis 

▪ Forma esporas de resistencia que sobreviven años 

▪ Produce una  exotoxina: origina intenso edema, necrosis y hemorragia

TRANSMISIÓN 

• Enfermedad de herbívoros (ovejas, cabras...) 

• Zoonosis profesional: los humanos se infectan por exposición a los animales o productos animales contaminados 

• La infección se adquiere por: 

Inoculación de esporas en piel: ántrax o carbunco cutáneo

Ingestión de bacilos (muy raro): ántrax o carbunco intestinal

Inhalación de esporas (accidental, bioterrorismo): ántrax o carbunco respiratorio

ántrax o carbunco cutáneo

CLÍNICA 

•Más del 95% de los casos. En extremidades, en zonas descubiertas (brazos, manos, piernas, ...) 

• Lesiones cutáneas necróticas. Pústula dolorosa, que progresa apareciendo una zona edematosa alrededor. 

•Adenopatías.

ántrax o carbunco respiratorio

CLÍNICA 

• Las esporas de carbunco tras ser inhaladas, llegan a los alvéolos pulmonares, germinan y producen la toxina (neumonía). 

• Allí son fagocitados y transportados a los ganglios linfáticos (adenopatías mediastínicas) 

•Después paso a sangre  

•Sepsis o septicemia

Signo de ensanchamiento mediastínico por presencia de adenopatías 

Bacillus cereus

▪ Bacilos Gram (+) 

▪ En agar sangre, forma colonias betahemolíticas, grandes y planas, con apariencia de vidrio esmerilado. 

▪ Aerobios o anaerobios facultativos. 

▪ Produce enterotoxinas. 

▪ Muy difundido en el medio ambiente: suelo, agua, vegetación , flora intestinal.

CLÍNICA: TOXINFECCIÓN ALIMENTARIA 

-Síndrome emético (de aparición rápida)                         -Síndrome diarreico (de aparición tardía) 

TRANSMISIÓN: asociación con alimentos 

Síndrome emético: productos amiláceos (arroz y pasta). 

Síndrome diarreico: productos cárnicos, sopas, hortalizas, salsas, hierbas secas y especias.

Síndrome emético (por enterotoxina emética): 

• Aparición: 1-5 h consumo alimento.    • Duración: 6-24 horas.      •Síntomas: Náuseas y vómitos. 

Síndrome diarreico (por enterotoxina diarreica): 

• Aparición: 8-16 h consumo alimento.                  • Duración: 12-24 horas. 

• Síntomas: dolor abdominal, copiosa diarrea acuosa.

identificación

La presencia de microbiota polimicrobiana en las muestras (heces, vómitos, alimentos) hace aconsejable el empleo de medios selectivos y diferenciales como el Agar MYP. 

La polimixina B actúa como agente selectivo , el carácter diferencial lo confiere la actividad lecitinasa (zona de precipitación alrededor de la colonia) de B. Cereus sobre la yema de huevo y su incapacidad para catabolizar el manitol. .

El diagnóstico de certeza de toxiinfección por B. Cereus debe hacerse mediante la detección de toxina en los alimentos y/o en las heces. 

Existen varios métodos comerciales para detectar la enterotoxina (aglutinación indirecta inversa por látex o enzimoinmunoensayo).          

AGAR MYP: Manitol, Polimixina, Yema de huevo.

GÉNERO CLOSTRIDIUM

▪Clostridium tetani        ▪Clostridium botulinum        ▪Clostridium perfringens        ▪Clostridium difficile

Clostridium tetani

• Bacilo Gram (+) 

• Móvil por flagelos perítricos 

• Espora terminal deformante: aspecto de “palillo de tambor” o “cerilla” 

• Anaerobio estricto 

• Hábitat principal: animales. Suelo e intestino del hombre y animales

• Potente neurotoxina: tetanoespasmina o toxina espasmogénica

ESPORAS → HERIDAS → GERMINACIÓN ESPORAS → ANAEROBIOSIS: MULTIPLICACIÓN  → SÍNTESIS TETANOESPASMINA  

TETANOESPASMINA → UNIONES MIONEURONALES (neuronas alpha ) → Vía NEURONAL  → MÉDULA ESPINAL → NEURONA INHIBITORIA → INHIBICIÓN LIBERACIÓN GLICINA (neurotransmisor inhibidor) →  HIPERACTIVIDAD MOTORA

Clínica: TÉTANOS

• Pº incubación: unas 2 semanas. 

•Fuertes contracciones musculares: trismus, risa sardónica. Fracturas óseas y contractura de músculos Opistótonos, respiratorios. 

•Profilaxis: Vacuna DTP (Difteria (Corynebacterium diphtheriae, Tétanos, Tos ferina (Bordetella pertussis). 3 dosis 

Recuerdo cada 10 años en adultos 

Ante herida sospechosa: gammaglobulinas específicas.

Clostridium botulinum

• Bacilo Gram (+)anaerobio estricto 

• Esporulado 

• Esporas ovales subterminales deformantes 

• Productor de la más potente toxina biológica conocida:  Toxina botulínica

Transmisión 

• Vegetales en conserva o enlatados (caseros)       •Pescados ahumados      •Embutidos 

•Alimentos envasados al vacío                                •Miel (niños menores de 1 año)

TOXINA BOTULÍNICA (preformada en el alimento) → Absorción EN INTESTINO → Vía Linfática Y SANGUÍNEA →  SINAPSIS COLINERGICAS Periféricas → Inhibición Liberación ACETILCOLINA → PARÁLISIS FLÁCIDA

Clínica : BOTULISMO

BOTULISMO EN ADULTO 

•Dificultad deglutir y hablar                            •Debilidad progresiva con parálisis 

•Diplopía                               •Nauseas y vómitos          •Dificultad respiratoria 

BOTULISMO INFANTIL

•Estreñimiento                                                      •Debilidad 

•Mala alimentación o succión débil                         •Dificultad respiratoria

Clostridium perfringens

Carácterísticas identificativas:

- Anaerobio estricto.

- Bacilos rectos. Las esporas no suelen observarse, pero si aparecen son grandes y ovales.

- Gelatinasa positivo.

- Lactosa positivo y producen gas y SH2 en medio lactosa-sulfito. 

Clínica

•Contaminación de heridas      •Infecciones de piel y tejidos blandos: Gangrena gaseosa  

•Toxiinfecciones alimentarias

- Fuente de infección exógena: esporas (especialmente a partir de suelo).

- Fuente de infección endógena: comensal en el intestino del hombre, cérvix, vagina, etc. 

Su capacidad patogénica se debe al gran número de toxinas que es capaz de producir.

Toxiinfecciones alimentarias

• 8-24 h consumo alimento: calambres abdominales, diarrea acuosa, náuseas, fiebre, vómitos. Durante 1-2 días 

• Por la acción de enterotoxina tipo A. 

• Productos cárnicos implicados: estofados, jugos de carne, articulaciones de la carne asada y empanadas. 

• En alimentos preparados con antelación al consumo, enfriamiento lento y con refrigeración inadecuada. 

• Brotes relacionados con el suministro de comidas preparadas a instituciones.

• Detección rápida de la enterotoxina en heces por técnicas de aglutinación mediante látex o enzimoinmunoensayo.

Clostridium difficile

Puede  estar  formando  parte  de  la  flora intestinal (anaerobio estricto). Primera causa de diarrea y colitis asociada al uso  prolongado  de  antibióticos  de  amplio espectro en el ámbito hospitalario. Dos toxinas implicadas: A (enterotoxina) y B (citotoxina). Existen también kits rápidos de detección de estas toxinas en heces.

BACILOS GRAM POSITIVOS

NO PRODUCTORES DE ENDOSPORAS:   Corynebacterium spp.              Listeria monocytogenes.

GÉNERO Corynebacterium

-Bacilos curvados (forma de letras chinas)          -Débil e irregularmente teñidos por método de Gram 

- No esporulados, inmóviles                                -Aerobios o anaerobios facultativos 

-Corpúsculos metacromáticos.         -Se conocen unas 30 especies asociadas a patología en el ser humano. 

-Corynebacterium diphtheriae         - Difteroides (oportunistas): C. Urealyticum

Corynebacterium diphtheriae

IDENTIFICACIÓN 

Crece en medio de Loeffler (contiene biotina) y en agar sangre-telurito potásico (AST) formando pequeñas colonias negras-gris acero. 

Catalasa positivo                  Ureasa negativo

Sólo algunas cepas producen la toxina diftérica, exotoxina responsable del cuadro clínico de la difteria respiratoria y cutánea (rara). En faringe normal existen cepas no toxigénicas. 

DIFTERIA 

Faringitis  exudativa  con  intenso  edema,  adenopatías cervicales y formación de membranas grisáceas en tráquea y bronquios  por  acción de  la  toxina,  que  pueden  causar obstrucción respiratoria y muerte por asfixia.

Tinción de Gram de pseudomembranas (difteria)

Complicaciones: Miocarditis. Alteraciones motoras por afectación de los nervios periféricos.

Listeria monocytogenes

-Cocobacilo no esporulado                -Anaerobio facultativo 

-En agar sangre betahemolítica      -Toxina citolítica y hemolítica (listeriolisina) 

-Crece bien a 4ºC (en refrigeración) 

-Ampliamente distribuido en la naturaleza (en la tierra, vegetación, agua), y principalmente en el tubo digestivo de diversos animales.

-Glucosa positivo           -Catalasa positivo 

-Hidroliza la esculina      -NaCl 6,5% positivo 

-CAMP positivo 

-Móviles a 22-25ºC, no por encima de 36ºC

Listeria monocytogenes: listeriosis

TRANSMISIÓN 

Por alimentos contaminados, no cocinados: patés caseros, leche y quesos sin pasteurizar, carne, vegetales crudos, ... 

CLÍNICA 

▪ Adultos inmunocompetentes: asintomática o leve.  

▪ Adultos inmunodeprimidos: meningoencefalitis. Bacteriemia, 

▪ Embarazo: 

Madre desde cuadro febril leve a bacteriemia. 

Aborto por afectación intra útero del feto. 

Neonatos:  granulomatosis  infantiséptica:  abscesos  o granulomas diseminados en múltiples órganos. Mortalidad de hasta 80%.