Mecanismos que determinan la separación en cromatografía en papel

En líneas fundamentales, la cromatografía en papel es la técnica de separación e identificación de sustancias químicas mediante un disolvente que se mueve sobre hojas o tiras de papel de filtro. La correcta descripción de esta técnica es decepcionantemente sencilla, porque la mecánica de la operación es la sencillez misma. Se toma una pieza de papel de filtro y cerca de uno de sus extremos se deposita una gota o «mancha» de la solución que contiene la mezcla cuyas sustancias se quieren separar. Se deja secar la gota y quedará una mancha de las sustancias mezcladas. El extremo del papel más próximo a la mancha se introduce en un disolvente apropiado, pero sin que la mancha llegue a introducirse en él. En la cromatografía ascendente el disolvente se encuentra en una bandeja situada en el fondo de una cubeta en la que se sostiene el papel. Por capilaridad, va subiendo a través del papel.

El disolvente fluye a lo largo del papel, pasando por encima de la mancha de la mezcla de las sustancias. Al avanzar disuelve y arrastra las sustancias de la mancha, cada una de las cuales se mueve, por lo general, a distinta velocidad que las otras. Se deja actuar al disolvente durante un tiempo determinado. Entonces se seca el papel y se observan inmediatamente las sustancias separadas, si tienen color, o reveladas como manchas por medio de una reacción química apropiada. Esta técnica se conoce como cromatografía monodimensional y el papel resultante recibe el nombre de cromatograma monodimensional. 

1.- Las fuerzas propulsoras

Cuando se realiza un cromatograma en papel, las dos fuerzas propulsoras más importantes que actúan son el flujo del disolvente y la solubilidad de cada sustancia en el disolvente. 

2.- Las fuerzas retardantes:

Hay también dos fuerzas retardantes principales: la adsorción y el reparto.

Revelado de las sustancias separadas

Cuando los componentes del test son sustancias coloreadas, no se precisan otros medios de revelado. Cuando hay componentes incoloros, el cromatograma, ya seco, debe ser tratado con un reactivo apropiado que haga visibles las sustancias, reaccionando con ellas, para producir manchas de color, es decir, un reactivo de revelado o revelador.

2.-VENTAJAS DE LA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

La cromatografía en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros métodos cromatográficos (en columna, en papel, en fase gaseosa, ...) ya que el utillaje que precisa es más simple. El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la separación es generalmente mejor. Pueden usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruirían el cromatograma. El método es simple y los resultados son fácilmente reproducibles, lo que hace que sea un método adecuado para fines analíticos. Concretando, la cromatografía en capa fina presenta las siguientes ventajas sobre la cromatografía en papel:

-Existen familias de compuestos, sobre todo en el campo de los lípidos, donde la cromatografía en papel no ha producido los resultados apetecidos. -La cromatografía en papel se realiza sobre una capa delgada de celulosa cuyo soporte es ella misma, mientras que la cromatografía en capa fina puede llevarse a cabo sobre capas delgadas de una amplia variedad de materiales inorgánicos pulverizados, como gel de sílice, zeolita y alúmina y sobre sustancias orgánicas como celulosa y celulosas modificadas químicamente. Por lo tanto es posible elegir una capa de determinado material que sea más idóneo que el resto para el grupo de compuestos que se quiere separar. -El tiempo necesario para una separación satisfactoria es mucho “más corto” en la cromatografía en capa fina; la resolución es buena; las manchas, en general, son más compactas; se puede separar y recuperar con facilidad cantidades extraordinariamente pequeñas (hasta microgramo) . -Los reactivos de revelada fuertemente corrosivos, como el H2S04, pueden ser pulverizados sobre las láminas de sílice y de alúmina sin afectar al revestimiento. -La capa se puede raspar con una espátula fina para recuperar, por elución, el contenido de una mancha o de una sonda.

3.- LOS ADSORVENTES

Al realizar la elección del adsorbente se debe tener en cuenta el tamaño de las partículas del adsorbente, cuanto más finamente dividido esté mayor será su adhesión al soporte, aunque también se le puede añadir un adherente (yeso,...). Algunos de los adsorbentes más utilizados son:

Celulosa Almidón Azucares Gel de sílice (silicagel) Óxido de aluminio (alúmina) Carbón activo (carbón en polvo) 

6.-Elección DEL ELUYENTE

La elección del eluyente dependerá lógicamente del componente que se va a separar y del material en que la separación se lleva a cabo.

Principales eluyentes en orden creciente de polaridad:

Éter de petróleo. Éter dietílico. Ciclohexano. Acetato de etilo. Tetracloruro de carbono.* Piridina. Benceno.* Etanol. Cloroformo.* Metanol. Diclorometano. Agua.