Los lípidos como: los triglicéridos, los colesteroles y otros, no son solubles en el plasma, por lo que su transporte en él se realiza en forma de complejos moleculares llamados lipoproteínas, en las que el componente proteico se denomina apolipoproteína.

Los lípidos como: los triglicéridos, los colesteroles y otros, no son solubles en el plasma, por lo que su transporte en él se realiza en forma de complejos moleculares llamados lipoproteínas, en las que el componente proteico se denomina apolipoproteína.

Las lipoproteínas constituyen un sistema heterogéneo de partículas de diferentes tamaños y funciones metabólicas. Ellas poseen un núcleo hidrófobo que contiene los lípidos no polares (triglicéridos y colesterol esterificado), mientras que la superficie externa está constituida por lípidos polares (colesterol no esterificado y fosfolípidos) y apoproteínas.

Ciclo de lípidos exógenos
Los lípidos de la dieta se absorben en el intestino delgado y se incorporan a los quilomicrones, que son secretados a los vasos linfáticos y alcanzan la circulación sanguínea a través del conducto torácico. En la circulación, los triglicéridos son eliminados gradualmente de estas lipoproteínas por la acción de la lipoproteinlipasa (LpL). Al perder triglicéridos, el quilomicrón se vuelve más pequeño. Estos restos son eliminados por el hígado. El colesterol puede ser empleado por el hígado para formar componentes de la membrana celular o ácidos biliares, o se puede excretar en la orina. El hígado proporciona la única vía por la que el colesterol abandona el organismo en cantidades significativas.
Ciclo de los lípidos endógenos
El hígado sintetiza partículas de lipoproteínas de densidad muy baja que son sometidas a la misma forma de deslipidación que los quilomicrones por acción de la LpL. Esto da lugar a la acción de una lipoproteína de densidad intermedia (IDL), que se convierte en lipoproteína de baja densidad (LDL) con la deslipidación posterior. La LDL puede ser eliminada de la circulación por el receptor de LDL de alta afinidad o por otras vías de recogida de residuos que se cree que son importantes a concentraciones elevadas de LDL en el plasma.

Las partículas de lipoproteínas de alta densidad (HDL) derivan del hígado y del intestino. Actúan como lanzaderas de los esteres de colesterol, eliminando el colesterol de los tejidos periféricos y devolviéndolo al hígado. Las HDL son eliminadas directamente por el hígado o si son transformadas en otras lipoproteínas circulantes, que después vuelven al hígado. Este proceso se cree que es antiaterogénico y se ha demostrado que una concentración elevada de colesterol HDL en el plasma supone un riesgo menor de cardiopatía coronaria.
Transporte Reverso de Colesterol
Las HDL son responsables del transporte reverso de colesterol, es decir la movilización del colesterol desde los tejidos periféricos hasta el hígado, donde es transformado y excretado en forma de ácidos biliares.

Quilomicrones (Qm)-->Tienen un alto contenido en triglicéridos, se originan en el intestino y trasportan los lípidos de la dieta. A-I, A-II, A-IV, B- 48, C-I, C-II, C-III y E.
Cuando el plasma o suero contiene quilomicrones y se deja en reposo a temperatura de refrigeración, se observa la formación de un sobrenadante cremoso.
Lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL).-->Son lipoproteínas que transportan triglicéridos de origen endógeno y, en menor grado, colesterol.Se originan, sobre todo, en el hígado. B-100, C-I, C-II, C-III y E.
Lipoproteínas de densidad intermedia (IDL).-->Están constituidas por partículas lipoproteicas de densidad intermedia entre las VLDL y las lipoproteínas de baja densidad (LDL), transportan triglicéridos y, en menor grado, colesterol. B-100, C-III y E.

Lipoproteínas de baja densidad (LDL).-->Son muy ricas en colesterol esterificado y se originan de la transformación de las VLDL y de las IDL. Tienen la función de transportar colesterol hacia los tejidos periféricos. Están asociadas con la apoproteína B-100. Los altos niveles de colesterol plasmático dependen, sobre todo, del aumento de estas lipoproteínas.
Están identificadas como lipoproteínas aterogénicas.
Lipoproteínas de alta densidad (HDL).--> Son ricas en proteínas y fosfolípidos y transportan colesterol esterificado.Hay dos subclases principales de HDL: HDL2 y HDL3. El papel de las HDL parece ser el transporte del colesterol desde los tejidos periféricos hacia el hígado. A-I, A-II, C-I, C-IIA, C-III, D y E. se les reconoce un papel protector contra la aterosclerosis.

Lipoproteína-->Esta lipoproteína parece representar el vínculo entre el metabolismo de los lípidos y la fibrinólisis. Desde el punto de vista estructural, está compuesta de una molécula de apo B-100 unida por un puente di sulfuro a una lipoproteína (a) que se presenta en siete diferentes formas alélicas y está muy glicosilada. Existen marcadas similitudes antigénicas entre el plasminógeno y la lipoproteína (a) debido a semejanzas estructurales entre ambas. La presencia de la Lp (a) en la placa aterosclerótica y su capacidad de interferir la fibrinólisis sugieren un posible papel en la aterogénesis.

Alrededor del 75% del colesterol total se encuentra esterificado y el 25% restante en forma libre

Apo A I.-->Su función principal es el transporte reverso de colesterol, el cual favorece por su asociación con los fosfolípidos y el colesterol, por vía dependiente e independiente de receptores, a través de la activación de la LCAT.

Apo B 100-->Es el principal constituyente proteico de la VLDL, IDL, LDL y Lp(a). Es
una glicoproteína de gran tamaño, prácticamente insoluble en soluciones acuosas. La apo B 100 se sintetiza íntegramente en el hígado. Su principal función es el transporte del hígado a otros tejidos de lípidos, especialmente esteres de colesterol; en este transporte su reconocimiento por parte del receptor de LDL es fundamental, ya que permite la internalización y procesamiento intracelular de la partícula de LDL. Por lo tanto las concentraciones plasmáticas de colesterol vienen determinadas, en buena parte, por la eficacia de la interacción entre la apo B 100 y el receptor de LDL.

Apo C II-->Se encuentra en VLDL y quilomicrones mayoritariamente y su principal función es actuar como cofactor de la LpL, contribuyendo así al catabolismo de las lipoproteínas ricas en triglicéridos. Por lo tanto, la ausencia de apo C-II impide la lipólisis de VLDL y quilomicrones.
Apo C III -->Parece cumplir el papel contrario al de la apo C-II, es decir, inhibe la LpL. Así la actividad de la LpL sobre una partícula lipoproteica concreta parece depender de la razón apo C-II/apo C-III existente en la partícula. Además, la apo C.-III también actúa como activador de la LCAT.

Receptor de LDL-->El receptor de LDL, una glicoproteína presente en la superficie de todas
las células, cruza la membrana celular y se concentra en cavidades especiales de la membrana, llamadas cavidades cubiertas. Se une a las lipoproteínas que contienen las apolipoproteínas B y E, y las interioriza para su descomposición en el interior de la célula. Después los receptores son reciclados a la superficie celular. El número y la función de los receptores dictan la concentración de LDL en el plasma. Cuando la célula tiene suficiente colesterol, la síntesis de receptores queda inhibida; cuando la célula es deficitaria en colesterol, aumenta el número de receptores. La función inadecuada o la ausencia de estos receptores producen la hipercolesterolemia familiar.

NIVELES DISMINUIDOS DE COLESTEROL-->Recién nacidos y niños pequeños, Enfermedades crónicas. Ictericia obstructiva, colestasis intrahepática, Hepatitis grave, Cirrosis, Ancianos-
NIVELES AUMENTADOS DE COLESTEROL-->Síndrome nefrótico, Diabetes

DETERMINACION DE COLESTEROL TOTAL-->El colesterol sanguíneo se presenta en forma de esterol libre y en forma esterificada. El conocimiento del nivel lipídico plasmático (colesterol y triglicéridos) junto con el de las lipoproteínas de alta y baja densidad (HDL y LDL) son de gran ayuda en la detección de muchas condiciones ligadas a alteraciones metabólicas de alto riesgo. El desequilibrio del nivel de lipoproteínas plasmáticas conduce a las hiperlipoproteinemias, grupo de desórdenes que afectan los niveles de lípidos séricos causantes de la enfermedad cardíaca coronaria (ECC) y la arterioesclerosis, en las que los niveles de colesterol son importantes en su diagnóstico y clasificación.

metodo:CHOD -PAD (prueba enzimatica colorimetrica con factor aclarante de lipidos.)

fundamento: El colesterol se determina después de la hidrólisis enzimática y la oxidación. El indicador es la quinoneimina formada por el peróxido de hidrógeno y 4-aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa.
principio de la reaccion factor 840 a 546 nm.

Esteres de colesterol + H2O --CHE-->colesterol + acidos grasos
Colesterol + O2 CHO colestene-3-ona + H2O2
2 H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol-- POD-->quinoneimina + 4 H2O

Muestras lipémicas usualmente producen turbidez cuando se mezcla la muestra con el reactivo generando resultados elevados falsos.evita estos resultados elevados falsos por medio del factor aclarante de lipidos aclara totalmente la turbidez causada por las muestras lipémicas.

lineal hasta 750 mg/dl diluir 1+2 x3.

determinacion HDL COLESTEROL-->Para su determinación, existen diversos métodos: ultracentrifugación, electroforesis, cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y métodos de precipitación. El método de referencia es la ultracentrifugación y en clínica la determinación directa por métodos automáticos enzimáticos colorimétricos, previa precipitación.

metodo: precipitante y estandar a 546 nm. factor 320

fundamento: Los quilomicrones, VLDL (lipoproteínas de muy baja densidad) y LDL se precipitan por adición de ácido fosfotúngstico y cloruro de magnesio. Después de centrifugar, el sobrenadante contiene las HDL en las que se determina HDL colesterol.

determinacion LDL COLESTEROL.-->Cumple un rol predictivo preponderante para evaluar el riesgo cardiovascular. Útil en el diagnóstico de las dislipidemias y en el control terapéutico. El método de referencia es la ultra centrifugación; se lo determina también por electroforesis y precipitación. El colesterol LDL ha adquirido gran importancia por el poder predictivo de riesgo coronario y su valor puede ser estimado mediante la fórmula de Friedewald en la mayoría de los casos: LDL = CT - (TG / 5 + HDL) ( TG / 5 = relación de colesterol y triglicéridos en la VLDL es de 5:1)
determinacion trigliceridos-->deben ser obtenidos en ayunas de 12 a 14 horas.  Así permite hacer el cálculo de colesterol - LDL. La variación diurna provoca triglicéridos más bajos en la mañana y más elevados al medio día.

metodo:GPO PAP

fundamento-->Los triglicéridos son determinados después de hidrólisis enzimática con lipasas. El indicador es Quinoneimina formada a partir de peróxido de hidrógeno, 4-aminoantipirina y 4-chlorofenol bajo la influencia catalítica de peroxidasa.

principio de la reaccion

trigliceridos--(lipasa)-->glicerol+ac. grasos

glicerol+ATP--GK-->glicerol+3fosfato+ADP

glicerol3fosfato+O2--GPO-->fosfatoDH+H2O2

H2O2+4AAN+4clorofenol--POD-->quinoneimina+Hcl

• proteger de la luz
• tiene factor aclarante
• lineal hasta 1000 mg/dl diluir 1+5 X 5
• para corregir el glicerol libre se le debe restar 10 mg/dl del valor de trigliceridos calculados.

Inmunoanálisis. Las determinaciones se basan en el reconocimiento antigénico de una lipoproteína por un anticuerpo o grupos de anticuerpos, contra uno o más sitios antigénicos de la molécula. Los métodos utilizados son múltiples como el radioinmunoensayo, inmunodifusión radial, electroinmunoensayo, inmunonefelometría, ELISA, inmunofluorescencia. Aún no existe un patrón estandarizado por la complejidad de las determinaciones. En el laboratorio clínico están difundiéndose las técnicas inmunoturbidimétricas con analizadores automáticos.

ENZIMOLOGIA

La concentración de enzimas en suero es muy baja, sin embargo, dada su eleva capacidad catalítica, es posible determinar su actividad y suponer que ésta es proporcional a su concentración. Por tanto, el estudio de las enzimas en el laboratorio se basa en la demostración in vitro de la actividad catalítica.
Se puede determinar la actividad enzimática analizando:
La aparición de algún producto
La desaparición del sustrato
La variación de un cofactor o de algún componente de la reacción

la actividad de una enzima se mide mediante la determinación de la cantidad de sustrato formado por unidad de tiempo, en condiciones exactamente definidas (pH, Tª…) y estrictamente controladas.

reacción enzimática podemos diferenciar 3 fases:

La fase de retardo tiene lugar inmediatamente después de mezclar los reactivos con la muestra biológica. Es una fase de encuentro y acoplamiento de sustrato y enzima. Su duración es muy variable (segundos a minutos). 

fase lineal en la que la formación de producto permanece constante, siendo la concentración de enzima de la muestra es el único factor limitante. medida que va transcurriendo la reacción, llega un momento en que el
sustrato u otro reactivo se van agotando (fase de agotamiento de sustrato) y
la velocidad de reacción disminuye hasta anularse.

Para que una determinación enzimática sea válida es necesario realizarla en la fase lineal donde el único factor limitante es la concentración de la propia enzima y las condiciones de reacción son las óptimas (exceso de sustrato y otros reactivos).

¿Cómo se obtiene en el laboratorio clínico el valor numérico de actividad enzimática? la actividad enzimática se evalúa mediante ensayos espectrofotométricos, por tanto necesitamos seguir la evolución de alguno de los elementos que participan en la reacción y que, por supuesto, deben absorber luz a una determinada longitud de onda.

• Si el producto absorbe luz a una longitud de onda determinada podemos
  evaluar la aparición del producto analizando el incremento de
  absorbancia a dicha longitud de onda.
• Si el sustrato absorbe luz a una longitud de onda determinada podemos
  evaluar la desaparición del sustrato analizando la disminución de
  absorbancia a dicha longitud de onda.
• De igual modo podemos analizar la variación de un cofactor o de algún
  componente de la reacción.

CREATIN KINASA (CK)-->se halla elevada en pacientes con infarto de miocardio, distrofia muscular progresiva, miopatia alcohólica y delirium tremens, mientras que en pacientes con hepatitis y otras formas de enfermedad hepática su nivel no se ve alterado. Los altos niveles que se presentan en pacientes con hipotiroidismo reflejan los cambios musculares que acompañan a esta condición. . Estudios más recientes indican que, inexplicablemente, valores séricos elevados del CK pueden darse en pacientes con infarto y edema pulmonar. La especificidad del ensayo de la CK aumenta con la determinación de sus isoenzimas.

fundamento-->La CK cataliza la reacción entre la creatina fosfato (CP) y ADP con formación de creatina y ATP, convirtiendo esta última la glucosa en glucosa-6-fosfato (G6P) en presencia de hexoquinasa (HK). La G6P es oxidada a Gluconato-6P en presencia de NADP reducido en una reacción catalizada por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH). La conversión se controla cinéticamente a 340 nm a través del aumento de la absorbancia resultante de la reducción del NADP a NADPH, proporcional a la actividad de la CK presente en la muestra.

Muestras moderadamente o severamente hemolizadas son insatisfactorias para el ensayo, así como plasmas conteniendo EDTA, heparina, citrato o fluoruro por ocasionar velocidades de reacción erráticas. El suero debe separase rápidamente del coagulo. Dado que la CK sérica se inactiva rápidamente in vitro a temperatura ambiente,
se debe conservar el suero a 4ºC si el análisis se demora más de 4 horas. Sueros hemolizados producen valores elevados de CK, por poseer los eritrocitos adenilato kinasa.

• lectora a 340 nm.
• factor 3333lineal hasta 0.200 diluir 1+10 X11

CK-MB--> la prueba se basa en una determinacion enzimatica de Ck acompañada con un metodo de inmunoinhibicion. un Ac es incorporado al reactivo el cual se une especificamente a la sub-unidad M inhnibiendo su acyividad enzimatica. de tal forma que solo se mide la actividad enzimatica de la subunidad B. debido a que la concentracion de CkBB es circulacion es minima la ac. remanente multiplicado por 2 representa la actividad de CK MB.

antes de medir la CK MB se recomienda medir la CK total

factor: 8254; calculos: delta minutos= (A2-A1)/5:

Lactato deshidrogenasa-->es una enzima presente en todas las células del organismo que cataliza la reacción de Piruvato a Lactato. Es una enzima extracelular y su elevación es indicativa de daño tisular con la consecuente liberación de la enzima a la circulación.  cuando se alteran los niveles séricos de LDH total, la determinación de la isoenzima predominante posibilita la identificación del órgano comprometido (corazón, hígado, músculo esquelético, riñón).  Los niveles se ven aumentados de una forma evidente 8-12 horas tras un infarto de miocardio alcanzando su máximo 4-5 días más tarde.

Fundamento-->La lactato deshidrogenasa (LDH/LD) cataliza la reducción de piruvato a lactato en presencia de nicotinamida adenin dinucluceótido reducido (NADH) a pH 7,5. La reacción se controla cinéticamente a 340 nm a través de la disminución de la absorbancia resultante de la oxidación del NADH a NAD+ proporcional a la actividad LDH en la muestra.

Interferencias:
· La hemólisis ocasiona la liberación de LDH de los hematíes al medio circundante con la consiguiente elevación falsa de resultados.
· La hiperbilirrubinemia no afecta el ensayo.
· Concentraciones altas de urea inhiben el enzima.

DETEMINACIÓN DE ASPARTATO TRANSAMINASA (AST, SGOT, GOT)-->La transaminasa aspártica participa en la transferencia de un grupo amino entre aspartato y alfa-cetoácidos, usando como coenzima la piridoxal fosfato. La AST está ampliamente distribuida en los tejidos humanos, pero su mayor concentración se encuentra en el tejido cardiaco, hígado y músculo esquelético, con pequeñas cantidades en riñón, páncreas y eritrocitos. Tipo de determinación: enzimática
Fundamento del Método:-->La aspartato aminotransferasa (GOT) cataliza la transferencia del grupo
amino del aspartato al oxoglutarato (alfa-cetoglutarato) con la formación de glutamato y oxalacetato. La actividad de GOT es proporcional a la cantidad de oxalacetato formado en un tiempo prefijado, medidos colorimétricamente por la acción de la 2.4-dinitrofenilhidracina (DNFH) en medio alcalino.

MUESTRAS-->Suero libre de hemólisis., Las transaminasas son estables en el suero 24 horas a temperatura
ambiente o 1 semana a 2-8ºC. Muestras de pacientes sometidos a hemodiálisis, con severa deficiencia en vitamina B o con patologías relacionadas, son causa de infravaloración de los niveles de GOT y GPT. Altos niveles de hemólisis no son aptos para el ensayo. Otras drogas y substancias pueden afectar esta medición.

valores de referencia

CT: sospechoso > 200 mg/dl; elevado sobre 260 mg/dl

TG: sospechoso >150 mg/dl; elevado >200 mg/dl.

HDL: pronostico favorable H( >55 mg/dl) y M(>65 mg/dl); niveles de riego estandar H(35-55) y M (45-65); indicador de riesgo H (<35) y="" m="">35)><>

LDL: sospechosos a partir de 150 mg/dl; elevado apartir de 190 mg/dl.

CK total: H <ó= 171="" ui/l="" y="">ó=><ó=145>ó=145>

LDH: H <243 y="" m="">243><>

GOT: H hasta 35 U/L y M hasta 32 U/L.

GPT: H hasta 45 U/L y M 34 U/L

GGT: H <66 u/l="" y="" m="">66><39>39>

FA: H 40-129 U/L y M 35-104 U/L

Albumina: 3,8 - 5,1 mg/dl -38-51 g/l

PT: 6,6 - 8,7 g/dl ó 66 - 87 g/l

alfa amilasa: suero o plasma 28 -100 U/L; orina espontanea <ó =460u/l;="" orina="" de="" 24h="">ó><ó=410u>ó=410u>

lipasa: <ó =38="">ó>

BT: hasta 1,1 mg/dl

BD: hasta 0,25 mg/dl

urea: suero10-50 mg/dl; orina 20-35 mg/24h

creatina: H 0,6-1,1 mg/dl y M 0,5-0,9 mg/dl.

PT orina: niños de 3 años y adultos: 6,6- 8,7g/dl.