Artefactos en histología: causas en la cirugía y en el procesamiento de la muestra

Artefactos en el Procesamiento Histológico

Se define como artefacto cualquier alteración indeseada introducida en una muestra de tejido debido a las técnicas de procesamiento que se realizan para su observación.

Los artefactos pueden ocurrir en cualquier fase de la manipulación y se pueden clasificar en dos grupos principales:

• Artefactos causados en la técnica quirúrgica.
• Artefactos causados durante el procesamiento de la muestra.

Artefactos Causados en la Técnica Quirúrgica

Numerosos artefactos observados con el microscopio son consecuencia de haber transcurrido un tiempo excesivo entre el cese del flujo sanguíneo y la fijación del tejido.

En la extracción de biopsias, es crucial tener en cuenta a qué tratamiento se ha sometido previamente la muestra.

Artefactos Causados Durante el Procesamiento de la Muestra

Fijación

Durante la fijación se pueden producir diversas alteraciones del tejido como consecuencia de:

• Mala elección del fijador.
• Adherencia de las muestras al recipiente de fijación.
• Cantidad o tiempo inadecuados de fijador (fijación prolongada o insuficiente).

Deshidratación e Inclusión

Si tras la deshidratación y el aclarado de la muestra permanece agua en el tejido, la parafina no penetrará correctamente y la inclusión será defectuosa.

Si la deshidratación no es adecuada, pueden formarse cristales del fijador que permanecen en el tejido.

Además, la presencia de restos de agua en la muestra acarrea problemas de corte, provoca una mala tinción de esa zona y resulta en una mayor opacidad del tejido.

Si la deshidratación es excesiva en el tiempo, los tejidos se pueden volver frágiles y duros, lo que puede interferir con el proceso de corte y con los colorantes.

Es muy importante que las muestras no se sequen durante la deshidratación, ya que se pueden crear y retener burbujas de aire en la muestra.

Si el tiempo en el líquido aclarante ha sido demasiado largo, se producen retracciones del tejido.

Si la inclusión en parafina no fue buena, puede provocar que las estructuras tisulares se separen unas de otras.

Trazas de los líquidos de deshidratación y aclarado en la muestra incluida pueden llevar a secciones con arrugas.

Hay que tener especial cuidado cuando se manipulan las muestras con pinzas calientes durante el proceso de inclusión; estos instrumentos no deben estar sobrecalentados.

Retracción: Ocasionada por los alcoholes o por sobrecalentamiento con la parafina durante el proceso de inclusión.

Corte (Microtomía)

Una mala sujeción de la cuchilla o de cualquier otra pieza del micrótomo puede llevar a secciones con diferente grosor en distintas partes de la muestra, o incluso a la pérdida de esta. También puede ocurrir cuando el ángulo de la cuchilla es erróneo o la cuchilla no está bien afilada.

Cuando se selecciona un grosor de corte muy delgado, las secciones pueden salir arrugadas y, a veces, no es posible estirarlas adecuadamente en el baño de agua.

Baño Termostático (Flotación)

El agua que se emplea para estirar los cortes debe ser destilada para que, al evaporarse, no queden cristales.

Cuando la temperatura del agua es muy alta o muy baja, pueden generarse grietas en las secciones.

También hay que tener en cuenta la distribución de las secciones para evitar que se solapen o se arruguen por falta de espacio durante el estiramiento.

Tinción

La eliminación de la parafina debe ser completa antes de la tinción, porque los restos de parafina producen mala penetración de los colorantes, alterando la calidad de la tinción.

Cuando se tiñen las muestras mediante gota, hay que procurar que todo el corte quede cubierto por el colorante.

Montaje

Una vez teñidas las secciones, la deshidratación ha de ser completa para evitar la aparición de gotitas de agua en el medio de montaje.

El cubreobjetos tiene que estar limpio y hay que manipularlo cogiéndolo por los bordes.

Hay que tener cuidado con la cantidad de medio de montaje a utilizar.