Histoquímica parte 1
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Generalidades Lípidos: Mayor parte energía organismo. Funciones: absorción vit., sínt hormonas, aislamiento, relleno, mb celulares, vainas nerviosas. Aceites vegetales con ác. grasos insaturados. Grasas animales con ác. grasos saturados. Grupo heterogeneo; la mayor parte triglicéridos: glicerol + 3 ác. grasos. Reserva energética + imp. 1 g, doble energia que resto de nutrientes.
Ác. grasos: Moleculas por cadenas de carbono. Grupo carboxilo. Carbonos pares (16-22). Grupo carboxilo con carga negativa; caracter ác. Resto apolar o hidrofoba. Saturados: Enlaces simples . Misma distancia (1,54A) y mismo ángulo (110º). Van der Waals. Solidos a tª ambiente. + dificil de usar x org, ya q posibilidades de combinación "saturadas". Dificil romperlos, x lo q se acumulan. Insaturados: Enlaces dobles o triples. Diferent distancia y ángulo (123º), x tanto, menos Van der Waals. Líquidos a tª ambiente. Fosfolípidos: En mb. Detergentes bio. Colesterol: Intermb. Hormonas.
Clasificación lípidos: Homofásicos: Estado puro. Determinación sencilla. Sudán. Oil-Red-O. Colorante + soluble en lipido q en disolvente. Heterofásicos: Mezclados. Ej: fosfolípidos. Determinación sencilla. PAS.
Procesamiento histológico lípidos: Grasas solubles en disolventes orgánicos: cloroformo, benceno, xilol, alcohol, x lo q se perderia la grasa quedando huecos. X ello debemos incluir en gelatina o polietilenglicol o usar cortes congelados. Formol cálcico el mejor. OsO4 y fijadores con cromo.
Coloración xa grasas neutras (homofásicos): Mecanismos físicos. Colorante + soluble en grasa q en disolvente. Vienen en disolucion alcohol/acetona o alcohol/agua. Coloraciones progresivas. Precipitacion x evaporacion disolvente. Consejos: Lugar fresco y seco. Filtrar previamente. Cortes 15-20 micras. No + 10 min. Agitar con frec. No xilol. Montar gelatina/glicerina.Método Oil-Red-O: Distingue grasas. Nucleos: azules; Grasas: rojo variable. Sudán IV ó Escarlata R: 10 micras con criostato. Precipitacion colorante: cuidado!. Núcleos: azules; Lípidos: rojo intenso/naranja rojizo. Sudán negro xa lípidos: Núcleos y citoplasmas: rojo; Lípidos: negro; Mielina: negro. Azul de Nilo: Método de Lillie: No histoquímica. Diferencia gasas neutras de ácidas. Azul de Nilo con Rojo de Nilo 2%. El Azul de N. impuro disuelve las grasas ácidas el Rojo de N. disuelve las grasas neutras. Acidos grasos: azul oscuro; Grasas neutras: rosa/rojo. Hidratos de Carbono: Aportan energía. Combustión más limpia. Menos residuos. Los usa SNC. Una peque parte xa construcción moléculas complejas. Tipos de glúcidos: Almidones: Componente fundamental dieta. Son polisacaridos. Para asimilarlos transformarlos en monosacáridos, xa ello está la digestión. Almidón es cadena de glucosa, xa romper esta la AMILASA en saliva y fluidos intestinales. Calor previo. Digestibilidad depende de tamaño y ramificaciones.
Azúcares: Dulces. Mono o Disacáridos. Los simples (glc, fruc y galac) se absorven bien. Los complejos digeridos. El mono + comun y abundante: glucosa. Libre es rara, suele estar en disacaridos y almidón. El di + común y abundante: sacarosa (glucosa + fructosa). Sacarasa. Otros: maltosa, lactosa.Fibra: Complejas y resistente. No digeribles. Compo princi celulosa q es cadena larga de glc. Otros compo: hemicelulosa, lignina y sust. pécticas. Casi total de glucidos tranforma en glc, intestino y de ahí al hígado, xa dar glucogeno q es reserva energética. 100 hígado, 200 músculos. Exceso en grasas.Metabolismo glucidos x SNC. Insu, gluca y adre. Diabetes.Coloraciones xa glucógeno: Histoquímica PAS; No histoquímica: Carmín de Best. Tener en cuenta: No usar soluciones acuosa, mejor etanol 80%, Carnoy o Bouin Alcoho. En la hidratación, evitar disolucion del glucogeno, xa ello coloidinado con celoidina 2% del porta. Carmín de Best: detecta glucogeno en biopsias endometrio, xa saber si inicio fase secretora post-ovulatoria. Es regresiva. No especifica. Tiñe otras cosas. Control. Fijadores no acuosos.Núcleos: azul/negro; Glucógeno: rojo. Problemas: No especifico, usar control. Fenomenos de desplazamiento. Bases histoquímicas de los glúcidos: Polialcoholes oxidados con C y agua. Moleculas clasificadas como HC sin serlo, ya q estructura similar. Los polisacaridos son mono condensados con perdida de agua. Glucogeno es poli simple.Polisacáridos complejos: Mucopolisacárido: Neutros (NAGA, PAS + ) y Ácidos ( Ác. urónico, hialurónico). Los ác. son: sencillos o no sulfatados y complejos o sulfatados. Mucoproteína: complejos de prot y polisacáridos, predominan prot. Similares glucoprot. PAS + . Células hipofisis, mb basales, colageno.Mucolípido: polisacáridos y ác. grasos complejos. Cerebrósido y Gangliósido. PAS +. Técnica del PAS: Comunmente utilizada. Amplia aplicación en diagnostico histopatológico rutinario. Siendo poco específica puede ser enormemente selectiva mediante los controles. Fundamento: Oxidar tejidos con ác. periódico xa incrementar grupos carbonilo presentes en ellos, y demostrar así su presencia con reactivo de Schiff. Los HC tienen grupos carbonilos aislados; uno por molécula de mono,x ello es necesario oxidarlo xa incrementar dichos grupos, q solo pueden ser detectados por el Schiff si están contiguos o delimitados x grupos alcohólicos o amino. El oxidante tb puede ser ác. crómico. Reactivo de Schiff: Se obtiene a partir de la fucsina básica, tratada con ác. sulfuroso dando ác. sulfofucsínico. Xa desasorrollo correcto de la reacción, ambos grupos aldehídos deben estar entre 1 y 1.1 nm, distancia similiar a los dos radicales bencénicos. Núcleo: Azul; Material PAS +: Rojo oscuro/magenta.Técnica Plata Metenamina: Reducción radicales carbonilo tras oxidación previa de HC, sobre sales de Ag, x lo q la Ag metalica precipita. Oxidantes: Ác. crómico; Ác. periódico.El complejo a reducir es metenamina argéntica. pH alcalino, sino precipita. Estricto control pH xa n precipitación antes de tiempo. Ver mb en glomerulonefritis. Glucógeno, mucinas; Hongos; Mb basales; Fibras reticulina/elásticas: Negro TODO!
Ác. grasos: Moleculas por cadenas de carbono. Grupo carboxilo. Carbonos pares (16-22). Grupo carboxilo con carga negativa; caracter ác. Resto apolar o hidrofoba. Saturados: Enlaces simples . Misma distancia (1,54A) y mismo ángulo (110º). Van der Waals. Solidos a tª ambiente. + dificil de usar x org, ya q posibilidades de combinación "saturadas". Dificil romperlos, x lo q se acumulan. Insaturados: Enlaces dobles o triples. Diferent distancia y ángulo (123º), x tanto, menos Van der Waals. Líquidos a tª ambiente. Fosfolípidos: En mb. Detergentes bio. Colesterol: Intermb. Hormonas.
Clasificación lípidos: Homofásicos: Estado puro. Determinación sencilla. Sudán. Oil-Red-O. Colorante + soluble en lipido q en disolvente. Heterofásicos: Mezclados. Ej: fosfolípidos. Determinación sencilla. PAS.
Procesamiento histológico lípidos: Grasas solubles en disolventes orgánicos: cloroformo, benceno, xilol, alcohol, x lo q se perderia la grasa quedando huecos. X ello debemos incluir en gelatina o polietilenglicol o usar cortes congelados. Formol cálcico el mejor. OsO4 y fijadores con cromo.
Coloración xa grasas neutras (homofásicos): Mecanismos físicos. Colorante + soluble en grasa q en disolvente. Vienen en disolucion alcohol/acetona o alcohol/agua. Coloraciones progresivas. Precipitacion x evaporacion disolvente. Consejos: Lugar fresco y seco. Filtrar previamente. Cortes 15-20 micras. No + 10 min. Agitar con frec. No xilol. Montar gelatina/glicerina.Método Oil-Red-O: Distingue grasas. Nucleos: azules; Grasas: rojo variable. Sudán IV ó Escarlata R: 10 micras con criostato. Precipitacion colorante: cuidado!. Núcleos: azules; Lípidos: rojo intenso/naranja rojizo. Sudán negro xa lípidos: Núcleos y citoplasmas: rojo; Lípidos: negro; Mielina: negro. Azul de Nilo: Método de Lillie: No histoquímica. Diferencia gasas neutras de ácidas. Azul de Nilo con Rojo de Nilo 2%. El Azul de N. impuro disuelve las grasas ácidas el Rojo de N. disuelve las grasas neutras. Acidos grasos: azul oscuro; Grasas neutras: rosa/rojo. Hidratos de Carbono: Aportan energía. Combustión más limpia. Menos residuos. Los usa SNC. Una peque parte xa construcción moléculas complejas. Tipos de glúcidos: Almidones: Componente fundamental dieta. Son polisacaridos. Para asimilarlos transformarlos en monosacáridos, xa ello está la digestión. Almidón es cadena de glucosa, xa romper esta la AMILASA en saliva y fluidos intestinales. Calor previo. Digestibilidad depende de tamaño y ramificaciones.
Azúcares: Dulces. Mono o Disacáridos. Los simples (glc, fruc y galac) se absorven bien. Los complejos digeridos. El mono + comun y abundante: glucosa. Libre es rara, suele estar en disacaridos y almidón. El di + común y abundante: sacarosa (glucosa + fructosa). Sacarasa. Otros: maltosa, lactosa.Fibra: Complejas y resistente. No digeribles. Compo princi celulosa q es cadena larga de glc. Otros compo: hemicelulosa, lignina y sust. pécticas. Casi total de glucidos tranforma en glc, intestino y de ahí al hígado, xa dar glucogeno q es reserva energética. 100 hígado, 200 músculos. Exceso en grasas.Metabolismo glucidos x SNC. Insu, gluca y adre. Diabetes.Coloraciones xa glucógeno: Histoquímica PAS; No histoquímica: Carmín de Best. Tener en cuenta: No usar soluciones acuosa, mejor etanol 80%, Carnoy o Bouin Alcoho. En la hidratación, evitar disolucion del glucogeno, xa ello coloidinado con celoidina 2% del porta. Carmín de Best: detecta glucogeno en biopsias endometrio, xa saber si inicio fase secretora post-ovulatoria. Es regresiva. No especifica. Tiñe otras cosas. Control. Fijadores no acuosos.Núcleos: azul/negro; Glucógeno: rojo. Problemas: No especifico, usar control. Fenomenos de desplazamiento. Bases histoquímicas de los glúcidos: Polialcoholes oxidados con C y agua. Moleculas clasificadas como HC sin serlo, ya q estructura similar. Los polisacaridos son mono condensados con perdida de agua. Glucogeno es poli simple.Polisacáridos complejos: Mucopolisacárido: Neutros (NAGA, PAS + ) y Ácidos ( Ác. urónico, hialurónico). Los ác. son: sencillos o no sulfatados y complejos o sulfatados. Mucoproteína: complejos de prot y polisacáridos, predominan prot. Similares glucoprot. PAS + . Células hipofisis, mb basales, colageno.Mucolípido: polisacáridos y ác. grasos complejos. Cerebrósido y Gangliósido. PAS +. Técnica del PAS: Comunmente utilizada. Amplia aplicación en diagnostico histopatológico rutinario. Siendo poco específica puede ser enormemente selectiva mediante los controles. Fundamento: Oxidar tejidos con ác. periódico xa incrementar grupos carbonilo presentes en ellos, y demostrar así su presencia con reactivo de Schiff. Los HC tienen grupos carbonilos aislados; uno por molécula de mono,x ello es necesario oxidarlo xa incrementar dichos grupos, q solo pueden ser detectados por el Schiff si están contiguos o delimitados x grupos alcohólicos o amino. El oxidante tb puede ser ác. crómico. Reactivo de Schiff: Se obtiene a partir de la fucsina básica, tratada con ác. sulfuroso dando ác. sulfofucsínico. Xa desasorrollo correcto de la reacción, ambos grupos aldehídos deben estar entre 1 y 1.1 nm, distancia similiar a los dos radicales bencénicos. Núcleo: Azul; Material PAS +: Rojo oscuro/magenta.Técnica Plata Metenamina: Reducción radicales carbonilo tras oxidación previa de HC, sobre sales de Ag, x lo q la Ag metalica precipita. Oxidantes: Ác. crómico; Ác. periódico.El complejo a reducir es metenamina argéntica. pH alcalino, sino precipita. Estricto control pH xa n precipitación antes de tiempo. Ver mb en glomerulonefritis. Glucógeno, mucinas; Hongos; Mb basales; Fibras reticulina/elásticas: Negro TODO!