Herpes (VHS), Hepatitis B y VIH: infección, marcadores serológicos y técnicas de titulación viral

Infección primaria, persistencia (latencia) y reactivación del VHS

Infección primaria y multiplicación: El VHS-1 suele entrar por la mucosa oral o la piel, mientras que el VHS-2 lo hace por la mucosa genital. El virus se multiplica y produce lesiones vesiculares (pequeñas ampollas con líquido seroso lleno de virus).

Persistencia (latencia): El virus no muere; viaja por los nervios sensoriales hasta los ganglios nerviosos, donde queda «dormido» o latente.

• VHS-1: ganglio trigémino.
• VHS-2: ganglios lumbosacros.

Reactivación: Ante factores como estrés, luz UV, cambios hormonales o inmunosupresión, el virus despierta, viaja de regreso por la neurona y vuelve a multiplicarse en la piel, causando nuevas lesiones.

Hepatitis B aguda: estructura viral y marcadores serológicos

Estructura:

• Núcleo central de nucleocápside icosaédrica: antígeno core (AgHBc), AgHBe, ADN y ADN polimerasa.
• Envoltura viral: antígenos de superficie (AgHBs).

1. Marcadores tempranos (antes de los síntomas)

• HBsAg y HBeAg: Son los primeros marcadores que aparecen en sangre tras la exposición, surgiendo incluso antes de que empiecen los síntomas.
• HBsAg (antígeno de superficie): alcanza su pico máximo al inicio de los síntomas y suele persistir de 1 a 5 meses.

2. Evolución y recuperación

HBeAg: Este antígeno indica replicación viral activa. En un curso de recuperación, el HBeAg desaparece primero (antes que el HBsAg) y da lugar a la aparición del anticuerpo Anti-HBe, lo que indica que la persona se está recuperando. Cuando el HBsAg empieza a decaer y desaparece, indica que el cuerpo está eliminando el virus.

3. Marcadores de anticuerpos

• IgM Anti-HBc: Es el marcador clave de una infección aguda. Aparece poco después del HBsAg y desaparece conforme avanza la recuperación.
• Anti-HBs: Es el último en aparecer. Surge tras la desaparición del HBsAg y confiere inmunidad por vacuna a largo plazo o indica que ya ha pasado la infección.

Periodo de ventana (24-32)

Periodo ventana: Es el intervalo de tiempo (que puede durar hasta 6 meses) durante el cual el HBsAg ya ha desaparecido pero el Anti-HBs aún no es detectable. En este periodo, el único marcador positivo puede ser el Anti-HBc.

Importante: El antígeno del núcleo (Ag HBc) no se detecta en sangre mediante técnicas serológicas; su presencia se puede confirmar sólo mediante biopsia hepática.

Fases replicativa y no replicativa en hepatitis B crónica

Fase replicativa: Hepatitis crónica con hipertransaminasemia sostenida. Se observan: HBsAg, anticuerpo anti-HBc, HBeAg, ADN de VHB y actividad de la DNA polimerasa positivos.

Fase no replicativa:

• Las transaminasas descienden a valores casi normales.
• El HBeAg se negativiza y aparece el Anti-HBe (remisión).
• ADN VHB y DNA polimerasa negativos.
• El HBsAg desciende, pero habitualmente permanece de por vida.
• HBsAg persiste más de 6 meses más evidencia clínica de hepatitis.
• Ausencia de Anti-HBs.

Estructura del VIH y mecanismo de infección

Estructura:

• Envoltura externa: doble capa lipídica procedente de la célula infectada.
• Glucoproteínas: gp120 y gp41.
• Membrana interna: proteína p17.
• Nucleocápside: proteína p24.
• Transcriptasa inversa: asociada al ARN.
• Genoma: 2 moléculas idénticas de ARN.

Mecanismo de infección

1. Interacción de la gp120 viral con receptores CD4 presentes principalmente en linfocitos T helper (CD4) y en menor proporción en monocitos-macrófagos y células gliales cerebrales.
2. La envoltura viral se une a la membrana citoplasmática a través de la gp41.
3. Se libera el virus al citoplasma: pierde la cápside y el ARN, y mediante la transcriptasa inversa origina ADN circular que puede:

• Quedar en el citoplasma con posible efecto citopático.
• Pasar al núcleo e integrarse en el cromosoma, donde puede:
  • Permanecer latente.
  • Replicarse lentamente.
  • Replicarse rápidamente, originando lisis celular.

No se conocen bien los mecanismos que determinan el paso de un estado de latencia o de baja replicación a uno de alta actividad replicativa.

Técnicas de ensayo en placa para la titulación viral

Principio: Emplea cultivos celulares cuya monocapa se infecta con diluciones seriadas de la suspensión viral a titular.

• Tras 2–3 horas de incubación, se cubre la monocapa con un medio semisólido que evita que las nuevas partículas virales que se vayan formando se propaguen por toda la monocapa celular.
• Tras 2–3 ciclos de infección, alrededor de cada célula inicialmente infectada se observará una placa de lisis (o unidad formadora de placa, UFP).
• Para diferenciar las células infectadas de las no infectadas se emplean colorantes citológicos que teñirán las células no infectadas; de esta forma, las placas podrán contarse fácilmente y el título se expresará en UFP/ml.

En la observación típica, se presenta una lisis casi total de la monocapa celular. A medida que se avanza en las diluciones seriadas, el número de placas disminuye, lo que indica que se utilizaron diluciones más altas del virus.

Cultivo celular acelerado (Shell-vial)

Shell-vial: En tubos especiales (shell-vial) la muestra se deposita y se realiza una centrifugación a baja velocidad. La centrifugación acelera la adherencia y penetración del virus en la célula receptora. Esto permite, en 48 horas de incubación, identificar proteínas virales mediante anticuerpos monoclonales específicos marcados con fluoresceína.