Fundamentos y Procedimiento de la Electroforesis en Acetato de Celulosa

Principales técnicas de electroforesis

Electroforesis de Cellogel

El Cellogel (acetato de celulosa) es el soporte utilizado para realizar proteinogramas, los cuales constituyen un método semicuantitativo para la evaluación de las proteínas plasmáticas.

Preparación

El procedimiento parte de una muestra de suero. Las tiras de Cellogel deben sumergirse durante 10 minutos en la solución tampón para permitir que los poros se rellenen correctamente. Tras extraerlas de la solución, se secan cuidadosamente entre dos hojas de papel de filtro.

Asimismo, se deben preparar los siguientes reactivos:

• Solución tampón: Se puede emplear tampón Veronal (pH 8.5) o tampón TRIS (pH 8.6).
• Colorante.
• Solución decolorante: Metanol (45%) y ácido acético (10%).
• Solución transparentizadora: Metanol (85%) y ácido acético (15%).

Procedimiento de electroforesis

1. Se siembra la muestra en el lado catódico.
2. Se introduce el puente en la cubeta, asegurando el contacto entre el Cellogel y el tampón.
3. Se tapa la cubeta y se conecta a la fuente de alimentación, ajustando la intensidad a 0.1 A durante 35 minutos a 200 V.

Revelado

1. Se retira la tira de la cubeta y se sumerge durante 10 minutos en el colorante.
2. Se decolora pasando la tira por tres o cuatro bateas llenas de líquido decolorante, hasta que las bandas sean visibles sobre un fondo claro.
3. Se pasa la tira por una batea con la solución transparentizadora.
4. Se elimina el exceso de soluciones con dos hojas de papel de filtro.

Lectura

En la electroforesis de Cellogel, los resultados suelen expresarse como un porcentaje de cada fracción respecto a la concentración total. Esta información se obtiene mediante:

• Espectrofotometría: Se recortan varias franjas y se introducen en tubos con un disolvente que extrae las proteínas del Cellogel. Se obtiene una disolución por cada franja, se mide la absorbancia de cada una y se compara con la absorbancia obtenida para el total de proteínas.
• Densiometría: Un fotómetro cuantifica el colorante fijado en cada franja y lo representa mediante un proteinograma, proporcionando las fracciones de cada componente en relación con las proteínas totales.