Fundamentos de Microbiología: Clasificación, Características y Técnicas de Observación

Introducción a los Microorganismos

Los microorganismos son aquellos seres que solo son visibles con ayuda del microscopio. En este grupo se incluyen, además de las bacterias, los virus, las algas, los hongos, los protozoos y las rickettsias.

Clasificación y Propiedades de los Microorganismos

Tipos Celulares y Nutricionales

• Células Procariotas: Carecen de membrana nuclear, como las bacterias y los virus. Es importante notar que, al clasificar entre animales y vegetales, esta distinción pierde precisión, y las bacterias y virus no pueden incluirse en ninguno de los dos reinos tradicionales.
• Anaeróbicos: Crecen en ausencia de aire, ya que este les resulta tóxico.
• Auxótrofos: No sintetizan sus propios aminoácidos (aa).
• Heterótrofos: Su fuente de energía es la materia orgánica.
• Mesófilos: Crecen óptimamente entre 20 y 45 ºC.
• Parásitos: Su relación con otros seres vivos es de tipo predador-presa; pueden ser patógenos o no.

El Microscopio y sus Parámetros

El microscopio es un instrumento destinado a la observación de objetos pequeños mediante un sistema de lentes.

Características del Microscopio

Las propiedades fundamentales para la observación incluyen:

1. Aumento: Es la relación entre el ángulo bajo el cual se ve el objeto en el instrumento y el ángulo bajo el cual se vería el objeto real a una distancia convencional de 25 cm.
2. Profundidad de campo: Distancia máxima, medida en la dirección del eje óptico, para la que es aceptable la nitidez de los detalles en el espacio objeto.
3. Poder separador: Es la distancia mínima entre dos puntos cuyas imágenes pueden distinguirse como distintas.
4. Iluminación: En función de si el objeto es transparente u opaco, se ilumina de distintas formas.

Agentes Antimicrobianos

Agentes Microbicidas y Microbiostáticos

Estos agentes actúan de diversas maneras:

• Actúan Destruyendo: Calor, agentes químicos, radiaciones, agentes mecánicos (ultrasonidos).
• Actúan Separando: Filtración, ultracentrifugación.
• Inhiben el Crecimiento: Bajas temperaturas, desecación, liofilización, presión osmótica elevada, productos químicos.

Técnicas de Observación Microscópica

Preparación de Muestra Húmeda (Montaje)

Se describe un procedimiento para la observación rápida de una muestra líquida:

1. Se coloca una pequeña gota de la muestra en el centro de un portaobjetos.
2. Se coloca una gota de aceite en las cuatro esquinas del cubreobjetos.
3. Se coloca un portaobjetos excavado (con depresión) con la depresión hacia abajo sobre el cubreobjetos, de tal forma que la gota de la muestra quede en el centro de la depresión.
4. Se invierte rápidamente el conjunto sin que resbale la gota.
5. Se observa lo más rápido posible por el microscopio.

Procedimiento de Tinción de Gram

La tinción de Gram diferencia bacterias según su estructura de pared celular:

• Gram-positivas: No son decolorables con etanol y aparecen de color púrpura.
• Gram-negativas: Aparecen de color rojo.

Pasos de la Tinción de Gram

PASOS:

1. Se prepara una extensión fijada al calor a partir de un cultivo reciente de 18 a 24 horas.
2. Se coloca el portaobjetos en la cubeta de tinción y se cubre con solución de violeta cristal, durante 1 o 2 minutos.
3. Se lava con agua.
4. Se añade solución de Lugol cubriendo la extensión y se deja reposar un minuto.
5. Se decanta el Lugol, se seca con papel secante y se lava con etanol al 95% hasta que ya no se desprenda color violeta de la extensión.
6. Se lava de forma reiterada con agua.
7. Se cubre con solución de Fucsina Fenicada durante 20-30 segundos.
8. Se lava bien el portaobjetos y se seca con papel secante.
9. Se coloca un cubreobjetos.
10. Se observa hasta 100x utilizando aceite de inmersión.