Fundamentos de Cultivo Celular y Citogenética Humana

1. Fundamentos del Cultivo Celular

El cultivo celular permite estudiar la actividad e interacción intracelular, el flujo metabólico y la ecología celular.

Tipos y Clasificación

• Tipos: Cultivo de órganos, explantes y células (primarias y secundarias).
• Líneas celulares: Primarias y continuas (características).

Dinámica de Crecimiento

• Curva de crecimiento: Fases de latencia, exponencial y estacionaria.
• Crecimiento en monocapa: Adhesión a la superficie, proliferación/formación de colonias e inhibición por contacto.
• Suspensión: Adaptación al medio, proliferación e inhibición por densidad.

Soportes y Composición del Medio

• Soporte físico: Materiales (vidrio, plástico, matriz tridimensional, microesferas, metal) y recipientes (placa multipocillo, transwell, Petri, botella Roux, tipo Roller).
• Composición: Sales minerales, tampón, glucosa, aminoácidos, vitaminas, suplementos orgánicos, indicadores de pH, hormonas, factores de crecimiento, suero animal, antibióticos y antifúngicos.
• Condiciones físico-químicas: pH, osmolaridad, viscosidad, tensión superficial, atmósfera gaseosa y condiciones de incubación.

Procedimientos Técnicos

1. Disgregación celular: Métodos mecánicos y enzimáticos.
2. Selección de células: Basada en propiedades específicas o métodos inmunológicos.
3. Recuento y viabilidad: Uso de colorantes y procedimientos de contaje.
4. Mantenimiento: Descongelación, inicio del cultivo, control microscópico, cambio de medio y subcultivo (pase).

Aplicaciones: Investigación básica (metabolismo, diagnóstico), aplicada (inmunología, virología, farmacología, toxicología, oncología) y modernas (ingeniería de tejidos, terapia celular).

2. Citogenética y Ciclo Celular

Estructura Cromosómica

Componentes: cromátida, telómero, centrómero, cinetocoro, brazo, bandas, constricción secundaria y satélite. Clasificación según posición del centrómero: metacéntrico, submetacéntrico, acrocéntrico y telocéntrico.

Ciclo Celular y División

• Interfase: G1-G0, fase S (replicación de ADN), G2 (transcripción y duplicación).
• Mitosis: Profase, Metafase, Anafase, Telofase y citocinesis.

Análisis Cromosómico

• Técnicas de bandeo: G (tripsina-Giemsa), R (desnaturalización), Q (quinacrina), C (alcalino).
• Idiograma e ISCN: Protocolo de codificación para garantizar la interoperabilidad de datos.

Mutaciones y Aberraciones

• Tipos: Germinales o somáticas; cromosómicas, genéticas o genómicas.
• Alteraciones numéricas: Euploidía y aneuploidía (monosomía, trisomía, mosaicismo).
• Aberraciones estructurales: Deleción, duplicación, inversión (pericéntrica/paracéntrica) y traslocación (recíproca, robertsoniana).

Cariotipo: Obtención y Diagnóstico

Protocolo: cultivo (heparina, PHA), obtención, extensiones (colchicina, KCl, fijador de Carnoy), tinción y análisis. Se utilizan idiogramas de 400 bandas para validar anomalías. La citogenética oncológica actúa como biomarcador dinámico, permitiendo identificar sub-clones celulares mediante cariotipos compuestos.