Fundamentos de Bioquímica Clínica: Pruebas, Metabolismo y Diagnóstico

Reacción de Fehling (Azúcares Reductores)

Qué detecta: Azúcares reductores (glucosa, fructosa, etc.).

En qué se basa: Capacidad del grupo carbonilo (aldehído o cetona) para reducir Cu²⁺ a Cu⁺.

Reactivos

• Fehling A: Sulfato de cobre (Cu²⁺), color azul.
• Fehling B: Solución alcalina con tartrato (medio básico).

Procedimiento general

Mezclar muestra + Fehling A + Fehling B y calentar.

Resultado

• Positivo: Precipitado rojo ladrillo (óxido cuproso, Cu₂O).
• Negativo: Permanece azul.

Idea clave para examen: Azúcar reductor = tiene carbono anomérico libre, por lo tanto, puede oxidarse. Se oxida el azúcar y se reduce el cobre.

Prueba del Lugol (Almidón)

Qué detecta: Polisacáridos, especialmente almidón.

En qué se basa: El yodo (Lugol) se introduce en la estructura helicoidal de la amilosa.

Procedimiento: Solución de almidón + Lugol y calentar.

Qué ocurre estructuralmente

• Amilosa: Forma estructura helicoidal lineal.
• Amilopectina: Forma estructura ramificada.
• Interacción: El yodo queda atrapado en la hélice, provocando un cambio de color.

Resultado

• Positivo (almidón): Azul intenso.
• Si se calienta: Desaparece el color (interacción física reversible).

Idea clave para examen: No es una reacción química, es una interacción física reversible. Detecta la amilosa del almidón.

1. Diagnóstico de Diabetes Mellitus (DM)

Según la American Diabetes Association se emplean:

• Glucosa plasmática en ayunas (FPG): Normal <100 mg/dL; prediabetes 100–125 mg/dL; diabetes ≥126 mg/dL.
• Prueba de tolerancia oral a la glucosa (OGTT, 75 g): Normal <140 mg/dL; prediabetes 140–199 mg/dL; diabetes ≥200 mg/dL.
• Hemoglobina glucosilada (HbA1c): Normal <5,7%; prediabetes 5,7–6,4%; diabetes ≥6,5%.

Criterios diagnósticos: Glucemia en ayunas ≥126 mg/dL (en ≥2 ocasiones), OGTT ≥200 mg/dL a las 2 horas, o síntomas clínicos + glucemia ≥200 mg/dL.

2. Complicaciones de la hiperglucemia crónica

Glicación proteica y formación de AGE, disfunción endotelial, aumento de ROS, producción de citoquinas, aterosclerosis, envejecimiento y patologías sistémicas. La HbA1c refleja la exposición prolongada a glucosa y el riesgo de complicaciones (p. ej., nefropatía).

3. Hipoglucemia

Glucosa en ayunas <45 mg/dL. Síntomas: letargia, confusión, pérdida de conciencia; si es brusca, activación adrenérgica con sudoración y taquicardia. Causas: ayuno, hiperinsulinismo (insulinoma), déficit de glucocorticoides, fármacos, alcohol, insulina exógena.

4. Determinación de la glucosa (fase preanalítica)

Muestra: Sangre venosa (suero/plasma). La glucólisis in vitro reduce la glucosa: ~7 mg/dL/h a temperatura ambiente; ~2 mg/dL/h a 4 ºC. Separar células ≤30 min o usar fluoruro sódico. Estabilidad: refrigerado 48 h.

5. Métodos analíticos

Métodos enzimáticos automatizados: glucosa deshidrogenasa, glucosa-oxidasa y hexoquinasa (método de referencia). Cuantificación espectrofotométrica proporcional a la producción de NADPH.

6. Consideraciones de la muestra

Ayuno ≥8 h; anticoagulante con inhibidor de glucólisis (estabilidad hasta 8 h); si no, centrifugar y separar plasma (estable 3 días a 2–8 ºC).

7. Adrenalina (epinefrina)

La adrenalina activa la glucogenólisis y lipólisis, aumenta la frecuencia cardíaca y produce broncodilatación; inhibe la glucogenogénesis, digestión/absorción y síntesis de ácidos grasos. Prepara al organismo para el estrés movilizando energía.

1. Transporte de lípidos por sangre

Los lípidos, insolubles en agua, circulan asociados a proteínas formando lipoproteínas:

• Quilomicrones: Se forman en enterocitos, transportan lípidos de la dieta por vía linfática hasta la sangre.
• VLDL: Sintetizadas en hígado, ricas en triglicéridos endógenos.
• IDL: Pueden ser captadas por el hígado o convertirse en LDL.
• LDL: Ricas en colesterol, lo distribuyen a tejidos periféricos (colesterol “malo”).
• HDL: Recogen colesterol de tejidos periféricos y lo devuelven al hígado (transporte reverso).

Las apolipoproteínas cumplen función estructural, de reconocimiento de receptores y regulación enzimática.

2. Formación de Malonil-CoA

Paso clave de la síntesis de ácidos grasos. La acetil-CoA carboxilasa convierte acetil-CoA en malonil-CoA usando ATP y bicarbonato. Está activada por insulina y citrato, e inhibida por glucagón y por los propios ácidos grasos.

3. Alteraciones del metabolismo lipídico

El exceso de lipoproteínas produce hiperlipoproteinemias. Pruebas habituales:

• Test de quilomicrones: Suero en ayunas con sobrenadante cremoso tras reposo.
• Colesterol total: Refleja el colesterol de todas las fracciones.
• Triglicéridos: Contenido global de triglicéridos.
• Colesterol HDL: Cuantificado tras precipitar VLDL, IDL y LDL.

1. Patrones de alteración proteica

Las proteínas plasmáticas se sintetizan en el hígado. Valores normales: 75–80 g/L.

Principales fracciones

• Albúmina (55%): Transporte y presión osmótica.
• Globulinas (38%): Transporte e inmunidad.
• Fibrinógeno (7%): Coagulación.

Alteraciones cuantitativas

• Hiperproteinemia (>85 g/L): Deshidratación o aumento real.
• Hipoproteinemia (<60 g/L): Hemodilución o descenso de síntesis/pérdidas.

Electroforesis de proteínas séricas (SPEP): Permite identificar patrones patológicos (albúmina baja, alfa/beta/gamma globulinas altas). Reactantes de fase aguda: Proteína C reactiva, VSG y procalcitonina.

2. Métodos generales de determinación de proteínas plasmáticas

• Reacción de Biuret: Método colorimétrico de referencia, detecta enlaces peptídicos (vira de azul a violeta).
• Refractometría: Rápida, con interferencias.
• Absorción UV: Sensible y precisa.
• Albúmina: Métodos de fijación de colorantes (p. ej., verde de bromocresol).
• Proteinuria: Métodos turbidimétricos y fijación de colorantes.