Fundamentos y Aplicaciones de las Técnicas de Aglutinación e Inmunoprecipitación en el Diagnóstico Serológico

Fundamentos de las Técnicas de Aglutinación e Inmunoprecipitación

Técnicas de Aglutinación: Principios y Fenómeno de Zona

Las Técnicas de Aglutinación se basan en la capacidad que tienen los antígenos (Ag) particulados multivalentes para unirse a sus anticuerpos (Ac) complementarios, dando lugar a inmunocomplejos o agregados visibles a simple vista. La aglutinación ocurre cuando las concentraciones de Ag-Ac son equivalentes. Si existe desequilibrio, tanto por exceso de uno o de otro, se produce un fenómeno de zona, resultando en un falso negativo.

El Fenómeno de Zona

• Si hay un exceso de Ag (Zona de Prozona): Se bloquean los dos fragmentos de la molécula de Ac, impidiendo que las partículas antigénicas queden unidas entre sí.
• Si hay exceso de Ac (Zona de Postzona): Se bloquean todos los puntos de unión del Ag, impidiendo de igual modo la agregación.

Aglutinación Directa

La Aglutinación Directa detecta las reacciones de aglutinación provocadas por la formación de inmunocomplejos. Se utiliza una suspensión de Ag particulados que expresan en su membrana los determinantes antigénicos o epítopos que intervendrán en la reacción. La lectura es inmediata, dado que a simple vista se aprecia la formación de esos agregados insolubles. La forma de visualizarlo depende del soporte sobre el que se realice la reacción:

• Si se realiza en un soporte plano: La reacción positiva implica la formación de grumos.
• Si se realiza en una placa de microtitulación: El positivo se evidencia por la formación de un velo en la superficie del pocillo; si no hay aglutinación, los agregados sedimentan en el fondo del pocillo en forma de botón.

Aglutinación Indirecta (Pasiva)

En la Aglutinación Indirecta se emplean Ag inicialmente solubles que deben insolubilizarse mediante fijación a un soporte inerte o a unas células. Las técnicas más habituales son:

1. Aglutinación de Látex en Placa

   Es una de las técnicas más utilizadas. La reacción positiva se observa por la aparición de un moteado característico, ausente en la reacción negativa. Normalmente, esta técnica es cualitativa, pero puede convertirse en semicuantitativa si se lleva a cabo con diluciones seriadas de un suero. Las partículas de látex son pequeñas esferas de polietileno suspendidas en un tampón sobre el que se unen Ag o Ac solubles. Así quedan sensibilizadas y se pueden utilizar para la detección de Ac o Ag, según el caso.

2. Hemaglutinación Indirecta (HAI)

   En lugar de partículas inertes, se pueden usar como soporte de los Ag hematíes convenientemente tratados. Esta reacción (la *HAI*) se realiza en placas de microtitulación con diluciones seriadas del suero. Para la lectura, la aparición de un velo rosáceo en el pocillo supone un resultado positivo; en cambio, la presencia de un botón de color rojo sería el resultado negativo, ya que si no existen Ac, los hematíes no aglutinan y caen al fondo de los pocillos.

3. Inhibición de la Hemaglutinación

   Esta técnica es una variante de la anterior. En las técnicas de hemaglutinación, la aglutinación se produce debido a la capacidad que tienen algunos virus y bacterias de unirse a los receptores de la membrana del hematíe. Esto se puede aprovechar para detectar en un suero problema Ac específicos frente a esos virus o bacterias. En ausencia de Ac específicos, el Ag del patógeno provoca la aglutinación de los hematíes.

4. Pruebas de Coombs

   Esta técnica está basada en una reacción de hemaglutinación. Se utiliza el *reactivo de Coombs*, que es un antisuero animal contra globulinas humanas y que contiene Ac frente a las inmunoglobulinas (Ig) humanas. Cuando se incuba este suero con hematíes lavados del paciente, el reactivo de Coombs provoca su aglutinación. Existen dos variantes:

   • Prueba de Coombs Directa: Permite la detección de Ac unidos a los hematíes.
   • Prueba de Coombs Indirecta: Permite la detección de Ig anti-Rh en el suero materno.

Técnicas de Precipitación

Las Técnicas de Precipitación se basan en la reacción que ocurre cuando un Ag soluble multivalente se une con su Ac específico, dando lugar a inmunocomplejos que precipitan en el medio de la reacción.

Precipitación en Gel

Son las más utilizadas y su preparación es muy sencilla:

1. Se disuelve agar en solución salina al baño maría.
2. Se deja enfriar sobre el soporte en el que se va a realizar la preparación.
3. Una vez frío y solidificado, se excavan los pocillos con un sacabocados.

Los componentes de la reacción se depositan en esos pocillos y difunden a través del gel. La velocidad de difusión de un Ag depende de varios factores: concentración, tamaño de la molécula y la viscosidad del medio.