Inmunoensayos radiactivos: RIA e IRMA, fundamentos y tipos

Resumen

El documento explica los inmunoensayos radiactivos, técnicas in vitro que combinan la especificidad de la reacción antígeno-anticuerpo con la alta sensibilidad de la detección radiactiva. Describe el radioinmunoensayo (RIA), en sus variantes convencional y competitiva, y el inmunorradiométrico (IRMA), en sus variantes competitiva y no competitiva o tipo sándwich. Al final, el estudiante sabrá cómo se interpreta la radiactividad medida en cada método.

Puntos clave

Los inmunoensayos radiactivos son técnicas in vitro basadas en la formación específica de complejos antígeno-anticuerpo.
Permiten detectar cantidades muy pequeñas (ng o incluso pg) sin necesidad de pretratar las muestras.
En el RIA convencional, a mayor cantidad de anticuerpos y antígenos marcados, menor concentración de anticuerpos no marcados en la muestra.
En el RIA competitivo, el antígeno de la muestra compite con el antígeno marcado por los anticuerpos fijados al soporte.
En el IRMA competitivo, a mayor concentración de antígeno de la muestra, menor cantidad de complejo marcado queda en el soporte.
En el IRMA no competitivo (sándwich) se usan dos anticuerpos y, a mayor radiactividad en el soporte, mayor cantidad de antígeno en la muestra.

Ponte a prueba

Fundamentos de los Inmunoensayos Radiactivos

Se trata de una técnica de laboratorio in vitro en la que se hacen reaccionar muestras biológicas del paciente (sangre u orina) con antígenos (Ag) producidos en cultivos celulares o por otros animales. Esta reacción es altamente específica y capaz de detectar cantidades muy pequeñas (ng o incluso pg) de anticuerpos (Ac) sin necesidad de pretratar las muestras.

Es un tipo de inmunoensayo o método radioinmunométrico que se basa en la formación específica de los complejos Ag-Ac, lo que dota al proceso de una gran especificidad, unido a la alta sensibilidad de los métodos radiológicos.

RIA (Radioinmunoensayo)

RIA Convencional

El Ag está unido a un soporte sólido en una cantidad desconocida y se incuba con muestras que pueden contener o no el Ac específico para dicho Ag.

Se lava el soporte sólido para eliminar los Ac que no hayan reaccionado.
Se introducen los Ac marcados radiactivamente, los cuales tienen la misma afinidad por el Ag que los no marcados.
Interpretación: A mayor cantidad de Ac y Ag marcados, menor concentración de Ac no marcados en la muestra inicial.

RIA Competitivo

El Ac está unido al soporte sólido en una cantidad desconocida. Se incuba con muestras que pueden contener o no el Ag específico, junto con Ag marcado radiactivamente.

Se lava el soporte sólido para eliminar los Ag que no hayan reaccionado.
Interpretación: A mayor cantidad de Ac y Ag marcados, menor concentración de Ag no marcados en la muestra inicial.

IRMA (Inmunorradiométrico)

IRMA Competitivo

El Ag está unido al soporte sólido en cantidad desconocida. La muestra a determinar se añade junto con Ag y Ac marcado radiactivamente. Se incuba y se lava para que solo quede el complejo Ag-Ac unido al soporte sólido.

Interpretación: A mayor concentración de Ag, menor cantidad de Ag-Ac marcado queda en el soporte.

IRMA No Competitivo (Tipo Sándwich)

Se utilizan dos tipos de Ac: uno unido al soporte y el otro marcado radiactivamente.

Se añade la muestra con el Ag a determinar.
Se incuba y se añade el segundo Ac marcado en exceso, el cual se une al Ag que ya está unido al primer Ac.
Se lava, quedando solo en el soporte el complejo Ac-Ag-Ac marcado.
Interpretación: A mayor concentración radiactiva en el soporte, mayor cantidad de Ag había en la muestra inicial.

Preguntas frecuentes

¿Qué diferencia hay entre RIA e IRMA?

En el RIA el anticuerpo es el reactivo fijado al soporte y el antígeno marcado compite con el de la muestra, mientras que en el IRMA el antígeno o el anticuerpo fijado al soporte se usa como reactivo y se mide directamente el marcador unido. Ambos se basan en la especificidad de la reacción antígeno-anticuerpo y en la detección radiactiva.

¿Qué significa un IRMA no competitivo tipo sándwich?

Es un método en el que se utilizan dos anticuerpos: uno unido al soporte y otro marcado radiactivamente. El antígeno de la muestra queda intercalado entre ambos, de modo que la radiactividad medida en el soporte es proporcional a la cantidad de antígeno inicial.