Esterilización por radiación gamma + esporas de hongos

TEMA 1.-Esterilización,Desinfección Y LIMPIEZA MATERIAL:

1-INTRODUCCIÓN:

En el laboratorio de microbiología es necesario trabajar en ausencia total de microorganismos, para evitar posibles contaminaciones; por ello se recurre a distintos métodos, que son técnicas destinadas a eliminar estos microorganismos.-.-.-.Se ha visto que la simple limpieza no es suficiente para este propósito, por lo que nos tenemos que valer de otras técnicas que son:__DESINFECCIÓN.__ESTERILlZACIÓN.

2.-DESINFECCIÓN:

La desinfección incluye todas las técnicas que destruyen los microorganismos patógenos, pero no de sus formas de resistencia,esporas.

La acción germicida puede ser:Bactericida.-

Actúan sobre las bacterias produciendo su muerte.

Fungicida.-

Actúan sobre los hongos produciendo su muerte.

Viricida.-

Actúan sobre los virus produciendo su muerte

Si inhiben el crecimiento, pero no los destruyen, hablaremos de:

Bacteriostático,fungiostático,virostático.

2.1-DESINFECCIÓN POR MÉTODOS FÍSICOS:

Pueden utilizar el calor o las radiaciones ultravioletascomo agentes desinfectantes, siendo los primeros los mas utilizados

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EBULLlCION:

Tratamiento con agua a 100°C.Consiste en introducir el material en agua hirviendo (100°C) durante unos 10 minutos como mínimo

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RADIACIONES ULTRAVIOLETAS:

Actúan a nivel genético, impidiendo la duplicación del ADN. Son radiaciones poco penetrantes su acción es superficial, se utiliza para reducción del nivel de MO en ambientes estériles -quirófanos-.

2.2 - DESINFECCIÓN POR MÉTODOS QUÍMICOS:

Se definen como: aquellos métodos de desinfección que utilizan sustancias químicas de naturaleza y propiedades muy diversas para conseguir la eliminación de los gérmenes patógenos.

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DESINFECTANTES:

Son sustancias que se aplican sobre material inerte sin alterarlo de forma apreciable con el fin de destruir los MO.Para q sea un buen desinfectante tiene que cumplir una serie de condiciones.

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ANTISÉPTICOS:

Son sustancias químicas de aplicación tópica sobre los tejidos vivos (piel, mucosas, heridas ...) que destruyen el crecimiento de los MO sin afectar a los tejidos sobre los que actúan;betadine.

DIFERENCIA:

todos los antisépticos pueden ser desinfectantes,pero no todos los desinfectantes pueden ser antisépticos.

Carácterísticas de los desinfectantes:__

Poder germicida lo más alto posible y amplio espectro de acción a bajas concentraciones__No ser tóxicos para el hombre, ni corrosivo para el material__Poseer alto poder de penetración, soluble en agua y en fluidos tisulares__Económico, de fácil aplicación y adquisición__Inerte__Estable en su composición habitual.

Formas de administración de los desinfectantes:

Loción.__Inmersión.__Pulverización.__Aspersión.

Los desinfectantes más utilizados son:

Derivados de amonio Cuaternario

Se pueden utilizar diluidos al 1% para la desinfección de manos. Su uso más corriente es para la limpieza-desinfección de paredes, suelos, ropa y objetos en general.-Cloruro de benzalconio.-Cetrimida.

Compuestos fenólicos

Son muy eficaces, se suelen utilizar mezclas con derivados de amonio Cuaternario para aumentar el espectro de acción y su poder de penetración. -hexacloroformo,tricresol(zotal)

Compuestos clorados

Son utilizados para desinfección de superficies, ropas, urinarios, etc. Se suelen usar diluidos en agua y un ejemplo típico lo constituyen las lejías (hipocloritos,cloramina).

GRUPO:

Alcoholes.A

NOMBREHABITUAL:

Alcohol etílico
Alcohol isopropílico

.FORMADEUTILIZACIÓN:

Alcohol etílico 70º
Alcohol isopropílico 70º

.OBSERVACIONES:

No son efectivos con las esporas ni ante muchos virus.

G:

Aldehídos.A

NH:

Formaldehído(formol).Glutaraldehido.

FU:

En solución acuosa hasta 40%. Normalmente 8%.Al 2% (alcalina).

OBS:

Destruye formas vegetativas y virus. El formol es irritante de piel y mucosas.

G:

Compuestos clorados.D

NH:

Hipocloritos (de superficie)Cloroazodina.Cloramina T.SuccinilcloraminasFU:


Se utilizan en distintas concentraciones, según el uso.

OBS:

Son bactericidas y viricidas muy efectivos. Se utilizan para desinfección de suelos y agua. Son corrosivos con los metales.

G:

Yodo.A

NH:

Tintura de yodoFU:


En solución alcohólica con ioduro potásico del 2 al5%.Solución acuosa al 2%.

OBS:

Son soluciones germicidas y tiñen la piel.

G:

Compuestos fenólicos.D

NH:

Hexaclorofeno.Tricresol (zotal).

FU:

Se utiliza en formade jabón sólido al 1-3%.Se utiliza en solución jabonosa al 5%.

OBS:

El efecto bactericida se reduce a baja temperatura y en medio alcalino.Son eficaces en solución acuosa.

G:

Yodóforos.A

NH:

Povidona yodada.

FU:

Se utiliza entre 1 y 1,5%.

OBS:

Activos frente a bacterias. Efectom tuberculicida y baja toxicidad.

G:

Ácido fenico.A

NH:

Ácido carbólico.

FU:

En solución al 2,5-5%.En pomada al 10%.

OBS:

Antiséptico poderoso, anestésico local. En estado puro caustico, muy venenoso.

G:

Biguanidas.A

NH:

Clorhexidina.

FU:

Se utiliza en solución acuosa y alcohólica mezclada con detergentes.

OBS:

Buen antiséptico. Se utiliza para el lavado de manos.

G:

Derivados de amonio Cuaternario.A

NH:

Cloruro de benzalconio (manos).Cloruro de cetilpiridina.Cloruro de bencetonio.

FU:

Se utilizan en solución acuosa.

OBS:

Son inactivos frente a esporas y virus.Se utilizan como antisépticos tópicos.

G:

Derivados metálicos.A

NH:

Mercurocromo.

FU:

Solución acuosa al 2%.

OBS:

Bacteriostáticos.

G:

Colorantes naturales.A

NH:

Violeta de genciana.

FU:

Solución acuosa al 1%.Solución alcohólica al 0,2%.

OBS:

Propiedades bactericidas para G(+) y hongos.

G:

Agua oxigenada.A

NH:

Agua oxigenada.

FU:

Solución al 3%.

OBS:

Antiséptico débil.

G:

Detergentes aniónicos.A

NH:

Laurilsulfato sódico.Tetradecilsulfato sódico.

FU:

En distintas concentraciones.

OBS:

Pasta dentífrica.Esclerosante de venas varicosas.

3.-ESTERILIZACIÓN:

técnica de saneamiento preventivo que garantiza la eliminación total de todos los microorganismos (bacterias, hongos y virus) y sus formas de resistencia del material sometido a dicho proceso.-.-.-.En función del agente esterilizante, los sistemas de esterilización pueden clasificarse:__Físicos__Químicos __Mecánicos.--.-.El mecanismo de destrucción de los microorganismos variará en función del método aplicado y éste se selecciona dependiendo de las carácterísticas del material que se pretenda esterilizar..-.--.Esterilización +rapidaxcalor seco q xhumedo,xq interviene la Ty el vapor de agua.

3.1 MÉTODOS FÍSICOS:

A)CALOR SECO:

Aplica el calor como esterilizante. Dependiendo de la temperatura y del tiempo de aplicación se consigue o no esterilización. Las técnicas de esterilización por calor seco son:

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FLAMEADO

Consiste en exponer un objeto o parte de un material a la llama de un mechero durante uno o varios minutos, según el material de que se trate.
Este método se utiliza para esterilizar:__Punta del asa de siembra (hasta incandescencia).__Las bocas de los tubos de ensayo o matraces cuando se abren por el motivo que sea y siempre antes de cerrarlos.__Puntas de pipeta, etc

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INCINERACIÓN

Consiste en reducir a cenizas el material.Es utilizado para destruir material de un solo uso, por ejemplo jeringas, guantes, catéteres, etc.

INCINERADOR DE BACTERIAS

Se utiliza para esterilizar el asa o hilo de siembra con una resistencia eléctrica.

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Horno seco, ESTUFA Pasteur u horno Poupinel

Son hornos metálicos con bandejas ajustables en su interior. Suelen calentarse mediante resistencias eléctricas, pudiendo regularse su temperatura.-.-.-.Externamente estas estufas presentan un termómetro que indica en todo momento la temperatura que existe en el interior del horno (que deberá coincidir con la temperatura elegida). También incluye un selector de temperatura y en ocasiones un reloj. -.-.-.-.La esterilización se consigue a: 180°C durante 1 hora.170ºC durante 2 horas.160ºC durante 3 horas.-.-.-.Este tipo de esterilización actúa sobre los materiales en profundidad.

La esterilización se llevará a cabo de la forma siguiente:

1. Se preparan los instrumentos o materiales a esterilizar que deberán estar debidamente protegidos, identificados, y con la indicación de la fecha de esterilización por ejemplo envolvíéndolos en papeles especiales, colocándolos en el interior de cajas, etc.

2. Se introducen en la estufa y se conecta ésta seleccionando la temperatura en el termostato y el tiempo en el reloj (si lo hubiera), comenzará a contabilizar cuando alcance la temperatura seleccionada.

3. Transcurrido el tiempo deseado a la temperatura elegida se desconecta el interruptor y dejamos descender la temperatura hasta unos 50-60°C.

4. Abrimos la estufa y recogemos el material.

5. Este material, se considera que mantiene la esterilización durante 3 meses, por ello, todo el material debe ir identificado y con fecha de esterilización..--.Los materiales que se pueden esterilizar por este método son todo tipo de materiales, vidrio, porcelanas, metal sin filo etc. .-.-No se utiliza para esterilizar medios de cultivo, productos líquidos, telas, plásticos, etc .

Control y mantenimiento:

1.No utilizar las estufas para el secado o tratamiento térmico de productos que pueden desprender vapores susceptibles de hacer mezclas explosivas

2.No trabajar a una temperatura igual o inferior que la ambiental ya que, en este caso, el termómetro regulador no funciona correctamente

3.Todas las regulaciones de temperatura deben hacerse en sentido ascendente de menor a mayor temperatura.

4.Controlar la temperatura del interior, pues la del exterior solo es orientativa, se controlará cada día y en cada carga.

B) CALOR HÚMEDO:

Se diferencia del calor seco, en que en este método de esterilización, además del calor, interviene siempre el agua o vapor.

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AUTOCLAVE

Es un recipiente cilíndrico grande o pequeño que se cierra herméticamente. Su poder de esterilización es por el vapor de agua y se basa en la coagulación de las proteínas que componen el protoplasma celular.-.-.El autoclave es un aparato muy utilizado y sus propiedades esterilizadoras dependerán de las condiciones de presión y tiempo elegidos, es decir, se conseguirá esterilización si sometemos el autoclave a 1,2 atmósferas durante 20 minutos (121ºC), 2 atmósferas durante 10 minutos (134 ºC) ó 3 atmósferas durante 5 minutos (144 ºC). ¡¡¡¡¡¡¡¡¡DIBUJO!!!!!!

1.Tiempo de penetración.-

Tiempo necesario para que el material tenga la Tª de esterilización2.Tiempo de esterilización-.

Tiempo necesario para la esterilización (15 min)

3.Tiempo de seguridad.-

Tiempo que se añade como seguridad a la esterilización (5 min).

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VAPOR FLUENTE

Consiste en utilizar el autoclave siguiendo la técnica habitual pero con la llave de purga abierta, lo que impedirá que se produzca un aumento de presión y que la temperatura nunca sea superior a 100°C.-.-.Este método es utilizado para materiales o medios que no puedan soportar temperaturas superiores a 100ºC. Por ejemplo, los medios muy azucarados, para evitar su caramelización. Es un método poco usado en microbiología .

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TYNDALIZACIÓN

Es un método de ebulliciones consecutivas para conseguir la esterilización.-.-.Se utiliza en microbiología cuando existe un problema de contaminación en algún material o en el propio autoclave.-.-.-.Consiste básicamente en ebulliciones repetidas a lo largo de unos 3 o incluso 4 días, hasta que se elimina el germen contaminante.-.-.Teóricamente no se deben alcanzar temperaturas por encima de los 100°C y durante este intervalo no se debe abrir el aparato o recipiente que se somete a tyndalización.-.-.El objetivo de este método es destruir las esporas cuando éstas germinan, así como evitar contaminaciones por microorganismos resistentes.

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UPERIZACIÓN

Es un método muy utilizado en la industria alimentaria..-.-Consiste en tratar el alimento a una temperatura de unos 149-150 °C durante unos instantes (de 1 a 5 segundos). Su ventaja fundamental es que no se alteran las propiedades del alimento

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PASTEURIZACIÓN

No es un método de esterilización, no destruye las formas de resistencia.
. Es utilizado en la Industria alimentaria.-.-.Consiste en calentar el medio a temperaturas comprendidas entre 62 °C (30 minutos) y 72 °C (15 minutos).

C)RADIACIONES IONIZANTES

Las utilizadas en microbiología son:

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RAYOS ULTRAVIOLETA

Más, que para esterilizar, se usan para mantener la esterilidad de superficies y/o recintos.-.-.Se caracterizan porque tienen poca penetración. Actúan impidiendo y alterando la duplicación del ADN celular. Se debe evitar su acción sobre la piel.

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RAYOS GAMMA )

Se utilizan para conseguir esterilización en frío. Son producidos por isótopos radiactivos. Presentan un poder de penetración muy alto, constituyendo el método de esterilización más utilizado a nivel industrial.-.-.Se utiliza para esterilizar materiales de uso único o desechable (guantes, jeringas, catéteres, prótesis, válvulas, etc.) y en general cualquier tipo de material que pudiera alterarse por calor.

D)SISTEMAS DE FILTRACIÓN:

Son filtros que, como su nombre indica, van a separar del medio a filtrar todas aquellas estructuras que sobrepasen un determinado tamaño, según el tamaño del poro.-.-.La efectividad de un filtro va a ser proporcional al tamaño del poro, pudiendo conseguirse la esterilización. Podemos aumentar el poder de esterilización con la presencia de presión, vacío e incluso la carga del filtro, que generalmente suele ser positiva, ya que las bacterias en medios neutros tienen carga negativa.

Campana de seguridad:

Utiliza filtros de membrana y corriente de aire para crear en su interior un ambiente estéril.Cuando trabajamos con micobacterias.

3.2 MÉTODOS QUÍMICOS:

Sustancias químicas q producen esterilización

Los más empleados son:

Óxido de etileno

Se emplea en forma de gas , mezclado con dióxido de carbono, ya que el óxido de etileno puro es muy oxidante y al mezclarse con el oxígeno del aire podría explotar.-.-.Presenta un gran poder de penetración y como método de esterilización es muy efectivo y duradero.-.-.La esterilizaCión se va a producir a temperaturas bajas (de unos 55 ºC) con una humedad relativa alta (40-60%) durante un tiempo de media de 11 horas.-.-.Para que todo esto suceda se requiere de cámaras o instalaciones específicas para ello, que son muy caras.-.-.-.El óxido de etileno se puede aplicar a cualquier materia! Sensible al calor y que no pueda esterilizarse por otros métodos, por ejemplo instrumentos de endoscopia, plásticos termolábiles, cauchos, material eléctrico, etc.-.-.El material estará disponible para ser utilizado a las 48 horas después de la esterilización. El material deberá conservarse estéril en el interior de una bolsa de plástico cerrada por procedimientos termoeléctricos. La duración de dicha esterilización es de unos 6 meses.

Glutaraldehído activado

Es un producto líquido que se utiliza diluido al 20% y a pH alcalino. En esta solución se introduce el material limpio y se deja actuar unos 15-30 min. No es un método muy usado .

4- CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN:

Los sistemas de control son sistemas que permiten comprobar la eficacia del proceso de esterilización.

4.1 CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN DE TIPO FÍSICO:

Son sistemas de control incluidos en el aparato de esterilización y estos pueden ser:

Sistemas mecánicos oculares, tales como manómetros que miden la presión en el interior de la cámara.

Vacuómetros que miden el vacío en el interior de la misma, en ocasiones nos encontramos con sistemas que miden ambos parámetros.

Termómetros para indicar en cada momento del proceso !A temperatura que hay en el interior.-.-.-.La información que aportan solo indica las carácterísticas y condiciones físicas del proceso o, lo que es lo mismo, al funcionamiento del esterilizador.-.-.-.Se emplean como orientativos de la calidad de esterilización dado que se conoce que, en esas condiciones ambientales de presión, temperatura y tiempo, se produce la destrucción de toda forma de vida.-.-.-.La información de temperatura y presión, se muestra a lo largo del ciclo y se registra de forma digital, impresa en papel o representada en gráficas circulares o manualmente.

REGISTROS GRÁFICOS:

Son representaciones gráficas estandarizadas que registran !A evolución de los parámetros de presión y temperatura a lo largo de! Ciclo de esterilización.Se emplean de forma rutinaria en cada ciclo y, en una misma gráfica se pueden registrar varios procesos.

4.2 CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN DE TIPO QUÍMICO:

Están basados en productos químicos comercializados generalmente sobre un soporte de cinta de papel.-.-.Dichos productos químicos actuarán como indicadores del proceso de esterilización, ya que por encima de una determinada temperatura cambian de color. Este hecho servirá para saber si las condiciones de esterilización han sido las previstas.-.-.También, según la fabricación y formulación, con este tipo de sistemas químicos se pueden conocer otros parámetros, aunque fundamentalmente se utilizan los de control térmico.

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TIRAS REACTIVAS:

Son tirasimpregnadas por un determinado compuesto químico,el cual vira de color tras haber sido sometido a las condiciones correctas de esterilización.

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TUBOS DE BROWN:

Son tubos que contienen una sustancia indicadora líquida que cambia de color según la temperatura y tiempo de esterilización

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CINTAS ADHESIVAS:

Son controles químicos externos orientativos, . Se emplean para cerrar los paquetes, generalmente textiles o de piezas sueltas de material y son útiles tanto para la esterilización mediante vapor, como para gas óxido de etileno. Tiene que tener un cambio de color uniforme.Cinta minesota

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TIRAS DE PAPEL:

Son dispositivos rectangulares que informan de forma precisa sobre los parámetros del ciclo de esterilización y están compuestos por una sustancia química que reacciona cambiando de color en determinadas condiciones ambientales. .-.Se emplean como controles internos en esterilización por calor seco, calor húmedo y para gas OE, oxido etileno. P20º-<par aautoclave.Siempre q se pone el autoclave,se pone en el lugar donde mas idficultad parallegar tiene..-->

ENSAYO BOWÍE & DICK:

Tiene por finalidad, demostrar la ausencia de aire o cualquier otro tipo de gas distinto al vapor de agua que pueda impedir la rápida y uniforme penetración del vapor en toda la carga.-------hojas que llevan el químico,para q este bien tienen q estar las lineas de morado oscuro y el color uniforme,se utiliza todos los días en la 1º carga de utoclave vacía. 134º 5 minutos.

Se aplica:

Al principio de la jornada tras el programa flash (cuando el autoclave está sin carga) para comprobar la "calidad de! Vapor". Cuando se alcanzan las condiciones de temperatura, presión y tiempo de exposición adecuadas, la sustancia indicadora experimenta un viraje de color para facilitar su interpretación.

Interpretación de resultados:

El vapor no apto para la esterilización es sobresaturado (húmedo) o sobrecalentado (seco) y da lugar a un víraje de color incompleto, que informa al personal sobre la existencia de anomalías en el vapor.-.-.En tal caso, es necesario revisar las condiciones técnicas del autoclave , el agua del interior del mismo, puesto que no se garantiza la eficacia del proceso de esterilización.--..--