Ejercicios resueltos de laboratorio de bioquímica: espectrofotometría, proteínas, enzimas y electroforesis

Pract 2

  1. En una soluc coloread ¿De q dep la abs de luz?
c) N° de molec

2. Indiq param q se relac para obt un espetogram

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Absc (X): ldo Ord (Y): Absorb

3

*V

La intensid del color es prop a la conc del metab present

*F

Las sust col abs luz visib, su color corresp a la radiac absorb

*F

El cam opt, corresp al anch de la band electrom q atrav la soluc en estud

*V

La luz transm es dep de la dist recorr a trav de la soluc y de la cant conc del cromof

4. Una soluc desc de ribofalv tiene una A de 0.445 ¿Cual es la conc micromol si un estand de riboflav 30 micromol abs 0.332?

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30 mM -> 0.332| x -> 0.445 | x= 40.21 mM 

Pract 3

1. Si quiere mant solub la caseína, cuyo pI es 4.6 ¿q pH elije para prep una soluc de esta prot?

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Debido a q en el pI la caseína se vuelve insolub y siendo un pH debilm ac, se deber prep una soluc (debilm) básica. Se descarta un pH mas fuerte, puesto q podría desnaturaliz esta prot. Tamb podr emplearse un pH ac mas cerc a 7 q el pI

2. ¿Como puede det la presenc de prot en el sobrenad de una mezcla de 2 ml de suero sang y 2 ml de sulfato de amonio sat? Y ¿a q prot corresp?

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Se puede det llevándola a condic en dnd precipite. Ej: Agregando solv organ con const dialectr baja, para q se favorezc la precipitac. Luego si esta precipit probab la prot corresp a seroalbumina

3. Si el suero desprot se prep: tomando 1 ml de suero y luego de calentar se agreg 3 ml de NaCl 0.15M y se centrifug a 2000 g por 10 min, indiq cual es la diluc de la muestr tomada desde el sobrenad del tubo

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Se diluy 1 ml de suero y 3 ml de sobrenadant. Diluye 25%

1. Que entiende por pI de una prot

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Pto dnd la carga + y - de la prot son iguales, es decir, cndo la carga neta es 0. Es el pto con men solub.

2. Como se comport la seroglobulina y la seroalbumin del plasma sang con relac a su solub en

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Agua pura: Solub en ambas| Soluc cloruro de sodio 0.15 M: Solub en amb| Soluc sat de suulfato de sodio: Precipit y es solub.

3. Si para el suero sin desprot se necesit0.064 mmoles/ml de HCl para neutraliz, mientras para el suero desprotse gastar solo 0.016 mmoles/ml de HCl indiq en % al capac tamponant aport las prot al suero.

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0.064 -> 100%| 0.016 -> x| x= 25 % Es decir, capac es de un 75%

Pract 4

  1. Indiq dif entre ensayo cinet y uno de pto final:

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El ensay cinet corresp cuando se det la conc de maner continua o a una serie de t muy proxim durant la reacc. En cambio, el ensay de un pto final la reacc se detien luego de un t det y se mide la conc de product formad

2. En la activ que realiz para det activ de fosfatasa alcalina indiq la ventaja de utiliz p- nitrofenol como sustr:

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El p-nitrofenol al actuar como sustr hace q la fosfatas lo conviert mas rapid a product y así poder det la activ enzim de la fosfatasa de una forma mas precisa. Ademas absorbe a distinta ldo

Pract 5

1) Expliq fraccionam de fragm de DNA en un gel de agarosa por electrof a) A q lado se va a mov, pq:

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Se mov hacia el lado +, ya q esta tiene prop acidicas q le entregan la carga -. Plt, se vera atraído por el polo op (en este caso el lado +) b)Func agarosa, azul de bromofenol, bromuro de etidio

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Brom: Sirve para poder visualiz (intercalante). Azul: Indica el avanc de la reacc (Indicador del frente iónico). Agarosa: Princip hacer aparecer porors seg la conc, y así filtr de mejor manera.

2) a) Diferenc y func gel espaciador y separador

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Separad: Sus poros son mas grand q los del separad, y su pH es alreded de 6. Su func es aum el espac ordenand las molec. Separador: Separar molec seg tamaño de poros y su pH es alreded de 8 b)Expliq pq y como se logra la condic denat

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Pq esta condic nos sirv cnd se quiere saber el tamañ de la molec. Se logra gracias a BMe y SDS que estabiliza la denaturac ya q para lograr esta condic se req abrir enlac disulf b) Func tamp de corrida, tamp de carga

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De corrida: Cnd la agreg la muestr comienz a mov. Carga: Nos perm observar en la banda las molec q están carg