Cuestionario Técnico sobre Metodologías de PCR y Amplificación de Ácidos Nucleicos

Cuestionario de Evaluación sobre Técnicas de PCR

Preguntas y Respuestas Técnicas

• 1. ¿Si en una PCR múltiple se observan dos bandas en la electroforesis, de qué clase de resultado se trata?
  Resultado: POSITIVO.
• 2. Se puede usar para incorporar un control positivo interno:
  PCR Múltiple.
• 3. Indica en qué formato se añade el cofactor de las ADN polimerasas:
  MgCl₂.
• 4. Respecto a la cuantificación relativa en una PCR cuantitativa a tiempo real (Q-PCR):
  Todas correctas.
• 5. Tras finalizar el tercer ciclo de la PCR, ¿cuáles son los productos obtenidos?
  6 productos no deseados y 2 amplicones.
• 7. Respecto a la PCR de grandes fragmentos podemos decir que:
  Es una variante de la PCR estándar que permite aumentar el rendimiento cuando se amplifican fragmentos de entre 5 y 35 kb.
• 8. Indica en qué zona o fase de la curva de amplificación la señal fluorescente está por debajo del nivel de detección del equipo:
  Fase de ruido.
• 9. ¿Qué características diferenciales tienen las ADN polimerasas termoestables que las hacen idóneas para su uso en PCR?
  Realizan su actividad polimerasa a una temperatura óptima comprendida entre 70 ºC y 75 ºC.
• 10. Indica la opción incorrecta respecto a las sondas de hidrólisis o sondas TaqMan:
  Presentan el extremo 5’ fosforilado para evitar que la ADN polimerasa pueda extenderlas.
• 11. ¿Qué modalidad de la PCR estándar se ideó para evitar la aparición de productos de amplificación no deseados?
  PCR con inicio en caliente (Hot Start PCR).
• 12. ¿Cuál es la forma más sencilla para evitar la actividad de la enzima a bajas temperaturas?
  Preparar la mezcla de reacción sin ADN polimerasa.
• 13. ¿Con qué concentración de agarosa se realiza la electroforesis para analizar el resultado de los productos amplificados?
  0,5-2%.
• 14. ¿En qué tipo de PCR se monitoriza el proceso de amplificación mediante productos fluorescentes?
  PCR a tiempo real.
• 15. La PCR con transcripción inversa (RT-PCR) permite:
  Analizar moléculas de ARNm.
• 16. El DMSO son aditivos que se pueden añadir en la PCR para:
  Disminuir la Tm del ADN molde.
• 17. Indica la respuesta INCORRECTA respecto a la PCR:
  La fase de hibridación de los cebadores a la cadena molde tiene lugar entre 70-75 ºC.
• 18. Indica cuál de las siguientes opciones es la correspondiente a la curva de picos de fusión de una mutación en heterocigosis (curva con 2 picos de fusión):
  1 a la temperatura del punto de fusión de la sonda y el otro a una temperatura menor.
• 19. Teniendo en cuenta la regla para nombrar las enzimas, indica de qué organismo fue aislada la Tli ADN polimerasa (polimerasa con actividad exonucleasa 3’-5’):
  Thermococcus litoralis.