Cromatografia 3
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Cromatografía de Exclusión o de Exclusión molecular: Se basa en diferencias de tamaño, forma o carga entre las moléculas de los distintos componentes de la muestra, pero lo más habitual es aprovechar las diferencias de forma y tamaño.
Aplicaciones: Para la purificación de una proteína.
Se puede establecer una correlación entre el tamaño molecular y la movilidad en la columna de exclusión, por lo que se utiliza para determinar masas moleculares.Para eliminar sustancias de pequeño tamaño molecular de una muestra proteica, similar a la diálisis, pero más rápido.Cromatografía de afinidad.Variedad particular de cromatografía en la que la separación se base en la especificidad biológica singular de interacción entre un componente de la muestra y otra molécula unida a la fase estacionaria.Cromatografía en columna: 1.- Preparación del soporte y fase 2.- Aplicación de la muestra 3.- Elución a) Lavado de componentes no retenidos b) Liberación, desplazamiento o elución propiamente dicha de los componentes retenidos 4.- Recolección de fracciones o análisis del efluente en continuo 5.- Análisis, cuantificación o revelado 6.- Regeneración de la fase estacionaria Cromatografía plana: 1.- Preparación del soporte y fase estacionaria estacionaria 2.- Aplicación de la muestra 3.- Desarrollo de la cromatografía 4.- Secado de la placa 5.- Revelado y cuantificación en su caso.Cromatografía liquida de alta resolución HPLC: El HPLC, es una técnica cromatográfica usada para separar componentes usando una variedad de interacciones químicas entre el analito y la columna cromatográfica. Existen varios tipos de HPLC:
Cromatografía de fase normal o NP-HPLC: Fue el primer tipo de HPLC, separaba analitos basándose en la polaridad. Usa una fase estacionaria polar y una fase móvil no polar que se usa cuando el analito es polar.
Cromatografía de fase inversa:Este tipo de HPLC es el más común. En esta técnica se usa una fase estacionaria no polar y una fase móvil moderadamente polar. La fase estacionaria típica es silicio tratado con RMe2SiCl, donde R es una cadena lineal con un grupo alcalino.Las características del analito son importantes para sus propiedades de retención:
Las moléculas muy grandes pueden causar que la interacción no sea completa. El tiempo de retención aumenta con el área hidrofobicidad, que es inversamente proporcional al tamaño del soluto. Los componentes ramificados eluyen más rápido por que el área total esta disminuida.Añadir sales inorgánicas causa incremento lineal en la tensión superficial de soluciones acuosas, incrementando el tiempo de retención.
El pH también es importante porque modifica la hidrofobia del analito. Por eso se suele usar un buffer como fosfato sódico para controlar el pH. Cromatografía de gases: Se basa en la volatilización de la muestra y su posterior inyección en la cabeza de una columna cromatográfica. Para la elución de la muestra se usa un gas inerte como fase móvil, de esta manera la fase móvil no interacciona con las moléculas del analito, simplemente transporta el analito a través de la columna.
Existen dos tipos de cromatografía de gases (GC):
Cromatografía gas-sólido (GSC): la fase estacionaria es sólida y la retención de los analitos se produce mediante adsorción.Cromatografía gas-líquido (GLC): la fase estacionaria son moléculas de líquido inmovilizadas sobre la superficie de un gas inerte. Esta es la que se usa más ampliamente.
Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila-a (verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos (amarillo claro) y xantofilas (amarillo anaranjado) en diferentes proporciones.
Aplicaciones: Para la purificación de una proteína.
Se puede establecer una correlación entre el tamaño molecular y la movilidad en la columna de exclusión, por lo que se utiliza para determinar masas moleculares.Para eliminar sustancias de pequeño tamaño molecular de una muestra proteica, similar a la diálisis, pero más rápido.Cromatografía de afinidad.Variedad particular de cromatografía en la que la separación se base en la especificidad biológica singular de interacción entre un componente de la muestra y otra molécula unida a la fase estacionaria.Cromatografía en columna: 1.- Preparación del soporte y fase 2.- Aplicación de la muestra 3.- Elución a) Lavado de componentes no retenidos b) Liberación, desplazamiento o elución propiamente dicha de los componentes retenidos 4.- Recolección de fracciones o análisis del efluente en continuo 5.- Análisis, cuantificación o revelado 6.- Regeneración de la fase estacionaria Cromatografía plana: 1.- Preparación del soporte y fase estacionaria estacionaria 2.- Aplicación de la muestra 3.- Desarrollo de la cromatografía 4.- Secado de la placa 5.- Revelado y cuantificación en su caso.Cromatografía liquida de alta resolución HPLC: El HPLC, es una técnica cromatográfica usada para separar componentes usando una variedad de interacciones químicas entre el analito y la columna cromatográfica. Existen varios tipos de HPLC:
Cromatografía de fase normal o NP-HPLC: Fue el primer tipo de HPLC, separaba analitos basándose en la polaridad. Usa una fase estacionaria polar y una fase móvil no polar que se usa cuando el analito es polar.
Cromatografía de fase inversa:Este tipo de HPLC es el más común. En esta técnica se usa una fase estacionaria no polar y una fase móvil moderadamente polar. La fase estacionaria típica es silicio tratado con RMe2SiCl, donde R es una cadena lineal con un grupo alcalino.Las características del analito son importantes para sus propiedades de retención:
Las moléculas muy grandes pueden causar que la interacción no sea completa. El tiempo de retención aumenta con el área hidrofobicidad, que es inversamente proporcional al tamaño del soluto. Los componentes ramificados eluyen más rápido por que el área total esta disminuida.Añadir sales inorgánicas causa incremento lineal en la tensión superficial de soluciones acuosas, incrementando el tiempo de retención.
El pH también es importante porque modifica la hidrofobia del analito. Por eso se suele usar un buffer como fosfato sódico para controlar el pH. Cromatografía de gases: Se basa en la volatilización de la muestra y su posterior inyección en la cabeza de una columna cromatográfica. Para la elución de la muestra se usa un gas inerte como fase móvil, de esta manera la fase móvil no interacciona con las moléculas del analito, simplemente transporta el analito a través de la columna.
Existen dos tipos de cromatografía de gases (GC):
Cromatografía gas-sólido (GSC): la fase estacionaria es sólida y la retención de los analitos se produce mediante adsorción.Cromatografía gas-líquido (GLC): la fase estacionaria son moléculas de líquido inmovilizadas sobre la superficie de un gas inerte. Esta es la que se usa más ampliamente.
Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila-a (verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos (amarillo claro) y xantofilas (amarillo anaranjado) en diferentes proporciones.