Cromatografia 2
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Reveladores Más Comunes Para Cromatografía En Capa Fina: Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras pueden revelarse mediante: Luz UV si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase estacionaria impregnada con un indicador fluorescente.-La introducción de la placa en vapores de yodo.-El rocío con una solución de agua/H2SO4 1:1.-Calentar intensamente con un mechero hasta carbonizar los compuestos.Adsorbentes más Comunes para Cromatografía en Capa Fina: a) Silice gel (se utiliza en el 80% de las separaciones b) Óxido de Aluminio ó Alúmina (ácida, neutra ó básica)c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina)d) Poliamidas.Para la selección de los adsorbentes deber tomar las siguientes consideraciones: a) Polaridad b) Tamaño de partículac) Diámetro d) Área Superficial e) Homogeneidad f) Pureza.
Existen distintos tipos de análisis cualitativos para identificar los distintos componentes de la muestra tras realizar la cromatografía en capa fina:Uso de patrones. Consiste en aplicar a la placa la muestra desconocida y disoluciones de muestras purificadas, de las especies que probablemente pueden estar presentes en la muestra desconocida. Métodos de elución: Se raspa la zona de la placa que contiene el analito con una espátula o una navaja, y se recoge el sólido sobre un papel satinado. Se trasfiere a un tubo de ensayo u otro recipiente, donde el analito se disuelve con un disolvente adecuado y se separa de la fase estacionaria por centrifugación o filtración. Cromatografía en plano bidimensional: En este caso la muestra se coloca en una de las esquinas de una placa cuadrada y se realiza el desarrollo en dirección ascendente con el disolvente A. A continuación se elimina este disolvente por evaporación, y se gira la placa 90 grados, realizando ahora el desarrollo ascendente con el disolvente B. Tras la eliminación del disolvente, se determina la posición de los componentes con un reactivo de revelado, tipo ninhidrina, y las manchas originadas se identifican comparando sus posiciones con las de los estándares.
Factores que influyen en una separación por cromatografía de capa fina: a) Temperatura: A menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase estacionaria.b) La cromatografía debe llevarse a cabo en un área sin corrientes de aire.c) Limpieza de las placas: Muchas placas están contaminadas con grasa o agentes plastificantes o adhesivos. d) Pureza de los disolventes.Cromatografía en columna: La elución implica el transporte de una especie a través de una columna por la adición continuada de nueva fase móvil. El proceso empieza cuando una única porción de la muestra se introduce en la parte superior de la columna (tiempo t0) después de lo cual los componente de la muestra se distribuyen entre las dos fases, la introducción de fase móvil adicional, eluyente, hace que la fase móvil que contiene una parte de la muestra avance por la columna, donde tienen lugar un posterior reparto entre la fase móvil y las porciones frescas de la fase estacionaria a las que accede (tiempo t1).Mecanismos de separación: Cromatografía de adsorción: Diferente afinidad de adsorción de los componentes de la muestra sobre la superficie de un solidó activo.- La adsorción es la capacidad de las superficies para fijar moléculas.-La fase estacionaria es siempre sólida. Ejemplos: Alúmina, gel de sílice, carbón activado, fosfato cálcico, hidroxiapatito.Cromatografía de Intercambio Iónico: Diferente afinidad para el intercambio de iones de los componentes e la muestra.La fase estacionaria posee carga eléctrica y por ello interacciona con los componentes de la muestra que tienen carga opuestaIntercambio aniónico: La fase estacionaria posee carga positiva, une aniones, bien los del disolvente, o bien los de la muestra Intercambio catiónico: La fase estacionaria posee carga negativa, une cationes, bien los del disolvente o bien los de la muestra. Silos iones del soluto y la fase estacionaria tienen la misma carga, son excluidos.Cromatografía de Reparto: Diferente solubilidad de los componentes de la muestra en la fase estacionaria (cromatografía de gases), o diferentes solubilidades de los componentes en la fase móvil y la estacionaria (caso de la cromatografía liquida)La fase estacionaria es siempre liquida.
Existen distintos tipos de análisis cualitativos para identificar los distintos componentes de la muestra tras realizar la cromatografía en capa fina:Uso de patrones. Consiste en aplicar a la placa la muestra desconocida y disoluciones de muestras purificadas, de las especies que probablemente pueden estar presentes en la muestra desconocida. Métodos de elución: Se raspa la zona de la placa que contiene el analito con una espátula o una navaja, y se recoge el sólido sobre un papel satinado. Se trasfiere a un tubo de ensayo u otro recipiente, donde el analito se disuelve con un disolvente adecuado y se separa de la fase estacionaria por centrifugación o filtración. Cromatografía en plano bidimensional: En este caso la muestra se coloca en una de las esquinas de una placa cuadrada y se realiza el desarrollo en dirección ascendente con el disolvente A. A continuación se elimina este disolvente por evaporación, y se gira la placa 90 grados, realizando ahora el desarrollo ascendente con el disolvente B. Tras la eliminación del disolvente, se determina la posición de los componentes con un reactivo de revelado, tipo ninhidrina, y las manchas originadas se identifican comparando sus posiciones con las de los estándares.
Factores que influyen en una separación por cromatografía de capa fina: a) Temperatura: A menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase estacionaria.b) La cromatografía debe llevarse a cabo en un área sin corrientes de aire.c) Limpieza de las placas: Muchas placas están contaminadas con grasa o agentes plastificantes o adhesivos. d) Pureza de los disolventes.Cromatografía en columna: La elución implica el transporte de una especie a través de una columna por la adición continuada de nueva fase móvil. El proceso empieza cuando una única porción de la muestra se introduce en la parte superior de la columna (tiempo t0) después de lo cual los componente de la muestra se distribuyen entre las dos fases, la introducción de fase móvil adicional, eluyente, hace que la fase móvil que contiene una parte de la muestra avance por la columna, donde tienen lugar un posterior reparto entre la fase móvil y las porciones frescas de la fase estacionaria a las que accede (tiempo t1).Mecanismos de separación: Cromatografía de adsorción: Diferente afinidad de adsorción de los componentes de la muestra sobre la superficie de un solidó activo.- La adsorción es la capacidad de las superficies para fijar moléculas.-La fase estacionaria es siempre sólida. Ejemplos: Alúmina, gel de sílice, carbón activado, fosfato cálcico, hidroxiapatito.Cromatografía de Intercambio Iónico: Diferente afinidad para el intercambio de iones de los componentes e la muestra.La fase estacionaria posee carga eléctrica y por ello interacciona con los componentes de la muestra que tienen carga opuestaIntercambio aniónico: La fase estacionaria posee carga positiva, une aniones, bien los del disolvente, o bien los de la muestra Intercambio catiónico: La fase estacionaria posee carga negativa, une cationes, bien los del disolvente o bien los de la muestra. Silos iones del soluto y la fase estacionaria tienen la misma carga, son excluidos.Cromatografía de Reparto: Diferente solubilidad de los componentes de la muestra en la fase estacionaria (cromatografía de gases), o diferentes solubilidades de los componentes en la fase móvil y la estacionaria (caso de la cromatografía liquida)La fase estacionaria es siempre liquida.