Cromatografia

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Cromatografía: La cromatografía se engloba dentro de las llamadas técnicas de separación y permite el análisis de mezclas complejas de compuestos muy estrechamente relacionados químicamente. Son varias las modalidades usadas y se clasifican según la fase móvil (de gases, líquida) y por el tipo de soporte (columna, capa fina, papel) usados. La separación se lleva a cabo según la distinta interacción que presenta cada uno de los componentes de una muestra respecto a dos fases: una estacionaria y otra móvil que fluye sobre ella. Esta interacción puede ser de varios tipos que a su vez dan lugar a distintas subclases de cromatografía: de absorción, de reparto, de cambio iónico, de afinidad, etc.Cromatografía plana: Los métodos de cromatografía plana incluyen: Cromatografía en capa fina (TLC) Cromatografía en papel (PC). Electrocromatografía.En todos los casos se emplea una capa plana horizontal relativamente delgada de un material que a su vez es el soporte, o bien que recubre una superficie de vidrio, plástico o metálica. La fase móvil se mueve a través de la estacionaria por capilaridad, a veces ayudada por gravedad o por aplicación de un potencial eléctrico. En la actualidad, la cromatografía en plano se centra en la técnica de la capa fina, que es más rápida, tiene mejor resolución, y es más sensible que su alternativa en papel. Cromatografía en papel: Es una técnica utilizada para análisis inorgánico u orgánico cualitativo, trabajando con cantidades mínimas de sustancias.Pertenece al tipo “Cromatografía de partición” se fundamenta en que las sustancia problema, puedan tener diferentes coeficientes de reparto en dos disolventes de inmisibilidad limitada, uno permanece fijo en la superficie del papel “fase estacionaria” generalmente en agua, la fase móvil constituida generalmente por una mezcla de disolventes parcialmente miscibles en ella. Hay varios tipos de Cromatografía la ascendente (papel hacia arriba), descendente (papel invertido), radial y de separación de zonas y sectores.Las cámaras cromatográficas son de varios tipos, de forma cilíndrica, de unos 30-40 cm de altura deben cerrar perfectamente, para evitar la evaporación del disolvente que satura la atmósfera.


Se trabaja con papel cromatográfico: Schleider, Schull, Whatman, etc.Las sustancias a analizar al entrar en contacto con los disolventes empiezan su fase de movilidad, produciendo unas manchas características únicas para cada sustancia, las cuales dependerán de la cantidad de compuestos que las compongan.
Generalmente, estas manchas no son coloreadas de por sí y se ponen de manifiesto por su posible fluorescencia a la luz ultravioleta, frecuente en sustancias orgánica, o mediante reactivos químicos que pueden dar una reacción coloreada y que se reparten en gran estado de división.Los contornos de las manchas reveladas se señalan con lápiz y constituyen la referencia para la identificación de las sustancias aisladas. Como medida en cromatografía sobre papel se emplea el Rf (
Retention factor).Rf = Distancia medida desde el origen hasta el centro de la mancha (X) dividida por la distancia media desde el origen hasta el frente del disolvente (S). Rf = X/S.
Cromatografía en capa fina: Las separaciones en capa fina se realizan en placas de vidrio o plástico que se recubren con una capa delgada y adherente de partículas finamente dividas; esta es la capa estacionaria.El eluyente ascenderá, por capilaridad, por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo “manchas” de los componentesLas placas de capa fina se obtienen de forma comercial. Los tamaños son varios 5x20, 10x20, y 20x20. Estas placas comerciales se presentan en dos formatos. El convencional, donde las placas tienen un espesor de 200 a 250 ìm un tamaño de partícula de 20 ìm o más. Presentan por lo común unos 2000 platos teóricos en 12 cm. y con un tiempo de desarrollo de 25 min. -El de alta eficacia, que tienen películas de unos 100 ìm de espesor, y un diámetro de partícula de 5 ìm o menos. El número de platos teóricos es mayor unos 4000 en 3cm y con 10 min. de desarrollo.
Las placas de alta eficacia permiten mejores separaciones y en menos tiempo, pero tienen la desventaja de tener una menor capacidad de carga.

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