Control microbiológico en medicamentos: ensayo de esterilidad y sensibilidad a antibióticos

El ensayo de esterilidad

Se realiza con la finalidad de determinar la ausencia de MO en los lugares de fabricación como en los medicamentos. Los objetivos son:

• Determinar el nº de MO presentes
• Lograr la inhibición del MO
• Determinar la presencia de conservantes

KIRBY BAUER

El M.O. es inoculado en la superficie de una placa de agar, sobre el cual se colocan discos impregnados con una concentración conocida del antibiótico. Las placas se incuban por 16-18 horas a 35-37° C. Durante la incubación, el antibiótico difunde radialmente desde el disco a través del agar, por lo que su concentración va disminuyendo a medida que se aleja del disco. En un punto determinado, la concentración del antibiótico en el medio es incapaz de inhibir al germen en estudio. El diámetro del área de inhibición alrededor del disco puede ser convertido a las categorías de sensible, intermedio o resistente (S, I, o R) de acuerdo a tablas publicadas por los organismos encargados del control de tales métodos.

Aerobios estrictos

Requieren presencia de O para su desarrollo (pseudomona)

Anaerobios estrictos

Requieren la ausencia de O para su desarrollo (salmonella)

Anaerobios facultativos

Son aquellos que pueden desarrollarse aun en la presencia de O (staphylococus aureus)

Microaerófilos

Son aquellos que requieren pocas concentraciones de O. (Streptococus) se cultivan en la lata con vela.

Cultivos para anaerobios

Agar sangre (sólido) y tioglicolato (líquido) deben ser enriquecidos porque los anaerobios no utilizan el O como energía.

CIM (concentración inhibitoria mínima)

Diferencias de CIM con Kirby Bauer: el CIM es de dilución y en cambio K.B es de difusión. Dificultad: costoso y complejo, lleva más tiempo. Ventaja: se obtiene la mínima concentración con la que se inhibe el crecimiento, en cambio K.B te dice si es sensible o resistente a esa concentración que tiene el disco con ATB.

CAT 1

Cat1.1 Productos para ser aplicados sobre escaras, ulceraciones o quemaduras graves. Ausencia de gérmenes revivificables. Cat 1.2. Productos para ser administrados por vía inhalatoria. Recuento de aerobios viables totales: no más de 10 x gr o ml. Ausencia de Enterobacteriaceae en un gr o ml. Ausencia de Pseudomonas aeruginosa en un gr o ml. Ausencia de Staphylococcus aureus en un gr o ml.

PREP DE LAS PLACAS CON EL 1/2 DE CULTIVO según Kirby Bauer

Agar de Mueller Hinton, no otro. pH de 7,2 a 7,4. Este agar es el más indicado porque presenta buena reproducibilidad de resultados lote a lote. Es pobre en contenido de timina (compiten con las sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclinas, lo que daría falsas resistencias). Brinda buen crecimiento a muchos patógenos. Se encuentran gran cantidad de datos sobre pruebas de sensibilidad con este medio. Deben verterse por placa de 25 a 30 ml de agar fundido para obtener una altura de 4 mm. Esto es importante para no obtener halos excesivamente reducidos o ampliados. Preparadas y envueltas, pueden conservarse de 4 a 7 días en la heladera. Para evitar las gotas de condensación en la superficie del agar, secar las placas de 15 a 30 minutos invertidas en estufa a 37ºC antes de la siembra.

PREP DEL INÓCULO

Se toman 3 a 10 colonias bien aisladas con un ansa, y se introducen en 5 ml de caldo de triptina soya. Se pretende obtener la turbidez del testigo (0,5 de la escala Mc Farland)

ATB

Se toman 2/3 colonias puras con el ansa ojal y se diluye en caldo de tripteina soya hasta 0,5 escala Mc Farland de turbidez. Esquema (1se toma la colonia pura de una caja de Petri, 2 se diluye hasta turbidez 0,5, 3 se toma un hisopo y se escurre en la pared el exceso, 4 se realiza el hisopado 3 veces girando a cada 60º, 5 se agregan los monodiscos de atb.) Las causas de error, no conseguir la turbidez, no trabajar con los conceptos de esterilidad, agregar mas o menos de los 4mm del agar.

Tioglicolato

Para MO anaerobios, es indicador (rezorzurina en presencia de O cambia a rosa), glucosa como fuente de E, pequeña cantidad de agar (evitar difusión de CO2 y O2) Se agrega vaselina para mantener el ambiente anaeróbico.